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猪流行性腹泻病毒流行株AH2012/12的分离及感染性克隆的构建

文献类型: 会议论文

第一作者: 范宝超

作者: 范宝超 1 ; 俞正玉 1 ; 逄凤娇 1 ; 徐向伟 1 ; 张柏猛 1 ; 郭容利 2 ;

作者机构: 1.江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,江苏南京,210014

2.江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程

关键词: 猪流行性腹泻病毒;流行株分离;基因克隆;致病性

会议名称: 2016第六届中国兽药大会(中国畜牧兽医学会动物药品学分会第五届全国会员代表大会暨2016学术年会、中国微生物学会兽医微生物学专业委员会、中国畜牧兽医学会生物制品学分会2016年联合学术大会)

主办单位: 中国畜牧兽医学会`中国微生物学会`中国兽医协会

页码: 00000011-00000011

摘要: 2010年以来,猪流行性腹泻(PED)疫情大规模的再次爆发,对世界多个国家造成了重大的经济损失,并确定该疫情的病原体为猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异株.尽管市场上具有可用的商品化PEDV疫苗,但连续地PED的流行表明现有商品化疫苗的保护效果的局限性.并且,在对新流行PEDV毒株的分离及其病毒基因组操作方面所遇到的困难同样阻碍了新PEDV疫苗的研究开发.本研究中,从一个具有严重腹泻疫情养猪场的仔猪肠道样品中,分离得到一株高致病性PEDV毒株AH2012/12。全长基因组序列分析表明,该毒株与中国新流行毒株GD-1和PEDV-7C具有99%以上的同源性;进化树分析显示,AH2012/12同新PEDV流行毒株一样,位于G2b亚群。与传统PEDV毒株相比,其S基因具有58-61位和140位氨基酸插入,以及158-159位氨基酸缺失,表明AH2012/12株为流行毒株。该毒株在体外具有较好的生长特性,当传至第50代,其滴度可达107.5TCIDso/ml。随后,应用体外连接的方法,获得全长基因组片段:通过体外转录和细胞转染试验,成功获得该流行株的拯救毒株rAH2012/12。经体外试验发现,该重组毒株具有与亲本株相似的生长特性;动物试验也表明,该拯救毒株同样具有对哺乳仔猪的高致病性,可造成新生仔猪严重腹泻症状及100%死亡。以上数据表明,该中国PEDV流行株的感染性克隆方法得到成功建立。综上,该研究为开发有效的PEDV弱毒疫苗,及对该病原的基因功能及致病机制的研究奠定了坚实的基础。

分类号: S852.65

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