文献类型： 会议论文
第一作者： WANG Jing
作者： WANG Jing 1 ; 王警 2 ; ZHANG Bi-Cheng 1 ; 张碧成 1 ; GUO Yun-Yun 3 ;
作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,省部共建国家重点实验室培育基地—江苏省食品质量安全重点实验室,南京 210014
2.西藏农牧学院动物科学学院,林芝860000
3.西藏农牧学院
关键词： 产志贺毒素性大肠杆菌;血清型;分离菌株;生化特性;多重PCR法
会议名称： 江苏省畜牧兽医学会首届“青年科技论坛”
主办单位： 江苏省畜牧兽医学会
页码： 00000996-00001002
摘要： 目的：建立多重PCR法检测产志贺毒素性大肠杆菌(shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)主要血清型O26、O145、O45和O121的分析方法. 方法：根据GenBank登录序列,设计扩增O抗原翻转酶(wzx)基因的引物,建立PCR方法,并以STECO26、O145、O45和O121基因组为模板,检验多重PCR的灵敏度和特异性.使用建立的PCR,检测牛胴体表面拭子,阳性扩增条带送测序,以验证PCR扩增的可靠性.同时将阳性扩增样品,涂布显色平板,分离靶标血清型细菌. 结果：本研究成功建立STEC O26、O145、O45和O121的多重PCR方法,PCR循环参数中退火温度为60℃,扩增片段分别为249、353、890和587bp.多重PCR直接检测O26、O145、O45和O121时,最低检测限介于103～104CFU/mL,而增菌后再检测,最低检测限均为1CFU/mL.多重PCR用于其他血清型STEC,和非大肠杆菌扩增时,均未扩增出目的条带,只有O26、O145、O45和O121能够扩增出相应条带.当使用多重PCR直接检测胴体擦拭子时,阳性率为5.45％(3/55),主要为O26、O145血清型;增菌后检测阳性率为7.27％(4/55),主要为O26、O145和O121血清型.阳性PCR扩增样品,成功分离到O26两株、O145和O121各一株.分离菌株具有典型大肠杆菌的生化特性,携带STEC代表性毒力因子志贺毒素和紧密素,且具有多重耐药性. 结论：以STECO26、O145、O45和O121的wzx基因为检测靶标,成功建立多重PCR方法,灵敏度和特异性良好,与细菌分离联合使用,可减少工作量,精准分离目的病原菌.
分类号： R378.21
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