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舒伯特气单胞菌荧光定量PCR检测方法的建立及应用

文献类型： 会议论文

第一作者： 刘礼辉

作者： 刘礼辉 1 ; 胡蕾 1 ; 杨圆圆 2 ; 方伟 3 ; 林强 3 ; 付小哲 4 ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院珠江水产研究所,农业部渔用药物创制重点实验室,广东省水产动物免疫技术重点实验室,广东广州510380

2.上海海洋大学水产与生命学院,上海201306

3.广东省水生动物疫病预防控制中心,广东广州 510222

4.中国水产科学研究院珠江水产研究所,农业部渔用药物创制重点实验室,广东省水产动物免疫技术重点实验室,广东

关键词： 鳢科鱼类;舒伯特气单胞菌;rpoD基因;荧光定量PCR检测

会议名称： 广东水产学会第二届青年科技论坛

主办单位： 广东水产学会

页码： 00000095-00000101

摘要： 建立一种快速、灵敏的舒伯特气单胞菌(Aeromanas schubertii)检测方法.以舒伯特气单胞菌rpoD(RNA polymerase sigma-70factor)为靶标基因,设计特异性引物及TaqMan探针,建立舒伯特气单胞菌的TagMan实时荧光定量PCR检测方法,同时验证该方法的特异性、灵敏度、重复性,并用该方法对50份临床样品进行检测,验证其应用效果.含舒伯特气单胞菌rpoD基因的质粒拷贝数与循环阈值(CT)的标准曲线相关系数为1.000,扩增效率为94.705％.实时荧光定量PCR检测方法只对舒伯特气单胞菌的靶基因检测结果呈阳性,对嗜水气单胞菌(Aeromanas hydrophila)、维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)、温和气单胞菌(Aeromonas sobria)、诺卡氏菌(Nocardia seriolae)等其他14种致病菌的检测结果均为阴性,具有高度特异性;对舒伯特气单胞菌重组质粒和纯培养细菌的检出灵敏度分别为4.76拷贝/μL和15CFU/mL;批内和批间重复性试验变异系数分别为0.95％和1.05％.50份临床样品检测结果显示,该方法阳性样品检出率为22％,高于传统细菌分离方法(10％)的检出率.建立的舒伯特气单胞菌荧光定量PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,适用于舒伯特气单胞菌的快速诊断检测和流行病学调查.

分类号： S943.1:S941.42

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[1]舒伯特气单胞菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用. 刘礼辉,胡蕾,杨圆圆,方伟,林强,付小哲,梁红茹,赵永亮,李宁求. 2019

[2]泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)病原温和气单胞菌(Aeromonas sobria)分子鉴定及耐药性研究. 姚东瑞,邴旭文,朱明,毕可然,陈丽,张晓君. 2010

[3]舒伯特气单胞菌研究进展. 刘春,曹际振,张德锋,王庆,石存斌,常藕琴,林蠡. 2021

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[10]舒伯特气单胞菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用. LIU Chun. 2018

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