专利类型： 中国发明申请
专利权人： 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
发明人： 毕延震;郑新民;乔宪凤;刘西梅;周荆荣;华文君;李莉;肖红卫;张立苹;华再东;魏庆信
专利号： CN201010582369.X
摘要： 本发明公开了一种不含有人工碱基的无缝基因克隆方法，步骤有:i)根据目的基因和目标载体的序列，设计、合成嵌合体引物；ii)实施一步二元式搭桥耦联长距离PCR,获得融合线性片段；iii)DpnI消化PCR产物,去除带甲基化的模板质粒DNA;iv)转化大肠杆菌菌株DH5α；v)挑取单克隆菌落测序鉴定；vi)酶切确认重组质粒的整合情况。该方法不需要特殊的限制性内切酶和连接酶以及碱性磷酸酶，而且可以将任意目的基因融入任意目标载体的任意位置。该方法原理简单，操作简便，位点精确可控，阳性率高，适用范围广。
- 相关文献
作者其他论文 更多>>
-
猪SCD1和SCD5双基因敲除细胞系的构建及其对脂肪沉积的影响
作者：方钱海;郭帅;任红艳;白文哲;高斯;刘雯雯;陈洪波;张立苹
关键词：CRISPR/Cas9技术;硬脂酰辅酶A去饱和酶（SCD）;脂肪酸代谢;脂肪沉积;多基因编辑
-
核膜孔亚复合物Nup98/Rae1对小鼠卵母细胞体外减数分裂成熟的影响
作者：罗安凤;华再东;杨彩侠;陈矾
关键词：小鼠卵母细胞;Nup98;Rae1;体外成熟;减数分裂
-
泥鳅皮冻干粉对CCl4诱导小鼠肝损伤的保护作用
作者：欧阳敬禹;袁毅;郑佳贝;尤祥宇;苏江涛;糜志远;肖红卫;吴艳
关键词：泥鳅;冻干粉;肝损伤;氧化应激;凋亡
-
猪睾丸ACE启动子驱动的SPAG6 shRNA真核表达载体的构建
作者：张燕迪;顾涛涛;任红艳;毕延震;方桂杰
关键词：SPAG6;ACE;siRNA;shRNA;基因表达
-
多基因编辑技术的发展及其在畜牧种质创新中的应用
作者：刘雯雯;董发明;毕延震
关键词：CRISPR;多基因编辑;种质创新
-
靶向猪睾丸支持细胞PPP1CC基因siRNA的筛选与研究
作者：张燕迪;顾涛涛;方桂杰;任红艳;毕延震
关键词：PPP1CC;siRNA;基因表达
-
碱基编辑技术在猪遗传改良中的应用研究进展
作者：赵无迪;黄国斌;朱向星;毕延震;唐冬生
关键词：CRISPR/Cas9;基因编辑;单碱基编辑;猪;遗传改良
