专利类型： 中国发明申请
专利权人： 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
发明人： 毕延震;郑新民;邵长伟;潘雯;姜黎;欧阳辉伍;乔宪凤;刘西梅;周荆荣;华文君;李莉;肖红卫;张立苹;华再东;魏庆信
专利号： CN201010583675.5
摘要： 本发明公开了一种内参内置型双荧光素酶报告载体及其应用。萤火虫荧光素酶基因融合到pRL-TK载体的海肾荧光素酶基因和氨苄青霉素抗性基因之间，两种荧光素酶处于同一个载体上，萤火虫荧光素酶基因作为内参。利用一步式二元搭桥耦联长距离PCR及大肠杆菌体内同源重组方法,将萤火虫荧光素酶基因和海肾荧光素酶基因置于同一个载体上,同时在海肾荧光素酶基因的3’非翻译区引入单克隆位点以方便目的片段的克隆,由此构建成内参内置型的双荧光素酶报告载体。本发明具有重复性高,复孔变异小,操作简便,定量准确的优点。本发明适用于微小RNA靶分子的筛选、鉴定和确认,也适用于在细胞水平定量分析微小RNA的活性变化。
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