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牛传染性胸膜肺炎间接ELISA检测方法

文献类型： 获奖成果

作者：

作者机构：

获奖名称： 科学技术奖

获奖等级： 三等奖

关键词： 胸膜肺炎;传染性;方法;检测;检测方法;牛传染性胸膜肺炎;膜;传染性胸膜肺炎;间接;胸膜;传染;肺炎;肺;牛

第一完成单位： 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

获奖时间： 2008

摘要： 本研究采用了快速、简便、易于操作的一步重叠延伸PCR突变方法（OOE-PCR）对我国MmmSC分离株LppQ N末端基因进行定点突变，将第198位的A突变为G（编码Trp），并将突变后的LppQ N末端基因插入原核表达载体pET32a的多克隆位点，构建了LppQ N末端基因原核表达载体利用大肠杆菌进行融合表达，经优化表达参数发现表达产物主要存在于菌体裂解后的上清中。经亲和纯化后，对目的蛋白进行免疫检测，确定其有良好的免疫活性。利用纯化后的蛋白为ELISA包被抗原建立了间接ELISA检测方法。本研究不仅解决了全菌体抗原与相关支原体存在交叉的问题，而且表达的重组蛋白能够产业化和标准化生产。 本研究成果可应用于全国各省、市畜牧兽医站、进出口检疫部门、研究所、大专院校以及大型牛场等进行CBPP监测和检疫工作。目前已应用到新疆、内蒙古、海南、黑龙江等省市的各级兽医站、大型饲养场，对于有效控制CBPP的流行和保障养牛业健康持续发展具有重要意义。

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