类胡萝卜素在耐辐射奇球菌辐射抗性中的作用

杨桥; 张晓玲; 张磊; 代俊; 张俊祥; 焦炳华; 《生物化学与生物物理进展 》 2009 SCI 北大核心 CSCD

摘要：为研究耐辐射奇球菌(Deinococcus radiodurans)中类胡萝卜素的生化合成基因及其在该细菌抗辐射机制中的生物学作用,通过有机溶剂提取及LC-MS技术分析了D.radiodurans所产类胡萝卜素物质的主要组分,运用PCR及基因同源重组技术,对该菌中类胡萝卜素生化合成途径的八氢番茄红素合成酶(phytoene synthase,crtB)及八氢番茄红素脱氢酶(phytoene desaturase,crtI)基因进行了缺失突变,通过表型观察及HPLC定量分析突变株所产类胡萝卜素的组分变化确证突变株构建成功.野生株及crtB与crtI基因缺失突变株对电离辐射和H2O2的敏感性差异比较分析显示,和野生株相比,两种突变株对不同剂量电离辐射和不同浓度H2O2的敏感性更强.crtB及crtI基因功能研究表明,这两个关键性合成基因的缺失,导致突变株不能催化合成类胡萝卜素生化合成途径中的重要中间体——番茄红素及一系列下游产物.通过λ原噬菌体紫外线诱导系统、电子自旋共振(ESR)及DMPO自旋捕集技术,分别在体内和体外评价了其类胡萝卜素的抗氧化能力.结果表明,两种类胡萝卜素对超氧阴离子(O·2)及羟自由基(·OH)均表现出较强的清除作用.上述研究结果为探究D.radiodurans的类胡萝卜素合成基因和生物学功能,及类胡萝卜素在D.radiodurans抗辐射机制中的作用提供了新的直接实验证据.

关键词： 耐辐射奇球菌 类胡萝卜素 抗辐射 自由基

奥利亚罗非鱼DMRT1和DMRT4抗体制备及组织表达谱分析(英文)

曹谨玲; 曹哲民; 吴婷婷; 《遗传学报 》 2007 SCI 北大核心 CSCD

摘要：DMRT1和DMRT4是DMRT基因家族的成员,该家族成员与果蝇的性别决定基因和线虫性别决定基因一样,所编码的蛋白质都包含一个具有DNA结合能力的保守基序,即DM结构域,并以锌指结构与特异DNA序列相结合,在性别决定和分化发育中起调控作用。采用RT-PCR方法分别从奥利亚罗非鱼卵巢和精巢中扩增克隆出DMRT1和DMRT4全长cDNA片段,构建表达载体,在大肠杆菌中表达了BMP-DMRT4和BMP-DMRT1蛋白。经Xa切割、Amylose-sepharose柱层析纯化后作为抗原免疫新西兰白兔制备了DMRT1和DMRT4多克隆抗体,并进行纯化。对纯化多抗进行Western blot分析,结果表明获得了高特异性的DMRT1和DMRT4抗体。为了观察DMRT1和DMRT4在组织中的表达谱,首先,我们通过实时荧光定量RT-PCR检测雌雄奥利亚罗非鱼多种组织mRNA的表达,仅在卵巢和脑中检测到DMRT4,在精巢中检测到DMRT1;其次,制备了多种组织匀浆蛋白,使用纯化的抗体进行Western blot分析,仅分别在卵巢和精巢中检测到DMRT4和DMRT1蛋白的表达;制备多种奥利亚罗非鱼组织切片,使用纯化的DMRT4和DMRT1多抗进行免疫组织化学分析,发现DMRT4仅在卵巢表达,而DMRT1仅在精巢表达。这些结果有助于阐明DMRT4和DMRT1的功能及在鱼类性别调控中的作用。

关键词： DMRT1 DMRT4 原核表达 多克隆抗体 组织表达谱

帘蛤科贝类rDNA内转录间隔区序列的研究(英文)

程汉良; 夏德全; 吴婷婷; 孟学平; 吉红九; 董志国; 《遗传学报 》 2006 SCI 北大核心 CSCD

摘要：根据18SrDNA、5.8SrDNA和28SrDNA保守序列设计引物,应用聚合酶链式反应(PCR)扩增了文蛤(MeretrixmeretrixL.)、青蛤(CyclinasinensisG.)、硬壳蛤(MercenariamercenariaL.)和江户布目蛤(ProtothacajedoensisL.)4种帘蛤科贝类的第一内转录间隔区(ITS1)和第二内转录间隔区(ITS2)序列,并进行了测序。结果表明,文蛤、青蛤、硬壳蛤和江户布目蛤的ITS1扩增产物大小分别为978bp、663bp、757bp和942bp,GC含量分别为61.55%、60.78%、62.48%和64.86%～64.97%,其中ITS1序列长度分别为900bp、585bp、679bp和864bp,是迄今已报道双壳贝类中变化范围最大的,GC含量分别为61.67%、61.03%、63.03%和65.51%～65.62%,江户布目蛤种内ITS1序列有个体差异;ITS2扩增产物大小分别为644bp、618～620bp、593bp和513～514bp,GC含量分别为61.18%、61.29%～61.81%、62.73%和61.48%～61.60%,其中ITS2序列长度分别为412bp、386～388bp、361bp和281～282bp,GC含量分别为65.29%、65.21%～66.06%、67.87%和67.38%～67.62%,青蛤和江户布目蛤种内ITS2序列有个体差异。4种蛤ITS1和ITS2序列种间差异很大,有明显的长度多态性,ITS2种间序列相似度73.0%～89.1%,与ITS1的种间序列相似度48.7%～81.5%相比略高。此外,在4种蛤ITS1和ITS2序列中各发现2个与rRNA加工有关的保守区。通过对ITS1和ITS2序列的组装获得了4种蛤5.8SrRNA基因完整序列,序列长度都是157bp,GC含量57.96%～58.60%,4种蛤5.8SrRNA基因相对保守,种间序列差异度0-6.0%,共有10个变异位点,其中转换4处,颠换6处,硬壳蛤和江户布目蛤5.8SrRNA基因序列完全相同。以ITS2序列(包含5.8SrRNA和28SrRNA基因部分序列)为标记,调用北极蛤科的Arcticaislandica相应序列数据作外群,构建了帘蛤科贝类的系统发育树,其拓扑结构显示江户布目蛤与硬壳蛤亲缘关系最近,青蛤与其他3物种的亲缘关系最远。

关键词： 帘蛤科 核糖体DNA 内转录间隔区 5.8S rRNA基因 系统发育分析 物种鉴定

6种重要经济鱼类生长激素完整cDNA的克隆和序列分析(英文)

张竞男; 宋平; 胡珈瑞; 莫赛军; 彭茂宇; 周伟; 邹记兴; 胡隐昌; 《遗传学报 》 2005 SCI 北大核心 CSCD

摘要：通过RT PCR、3′ RACE、5′ RACE方法 ,从 6种重要经济鱼类———大眼鳜 (Sinipercakneri)、石斑鱼 (Epinepheluscoioides)、黄鳝 (Monopterusalbus)、鲶鱼 (Silurusasotus)、泥鳅 (Misgurnusanguillicaudatus)和方正银鲫 (CarassiusauratusgibelioBloch ,FangZhengcruciancarp)中克隆了生长激素 (GrowthHormone ,GH)的完整cDNA序列 (除石斑鱼序列外 ,其他生长激素序列均系第一次克隆 ) ,并详细分析了其序列特征。测序结果显示 ,克隆的 6种GHcDNA长度依次为95 3bp、10 2 3bp、82 5bp、10 82bp、115 4bp和 1180bp ,它们均包含一个长度为 6 0 0个左右核苷酸的完整阅读框 ,分别编码一个 2 0 0个左右氨基酸的蛋白 :大眼鳜、石斑鱼和黄鳝GH为 2 0 4个氨基酸 ,鲶鱼GH为 2 0 0个氨基酸 ,泥鳅和方正银鲫GH为 2 10个氨基酸。这 6种蛋白序列与其他已知的鱼类GH序列都有较高的同源性 ,特别是与相同目的鱼类序列相比。通过序列比对 ,在这些蛋白序列内鉴定了许多保守的氨基酸残基 ,其中的大多数聚集而成 5个保守域。基于这 6种鱼类序列的编码区和其他鱼类的GH编码序列进行分子系统学分析 ,结果 (MP和NJ树 )与根据形态特征构建的系统发育树基本一致 ,特别是在硬骨鱼类较大分类阶元 (目间、目以上 )的系统发育研究方面?

关键词： 生长激素 完整cDNA 序列分析

氢化物发生原子荧光光谱法测定食品和饲料中的铅

翟毓秀; 郝林华; 《分析化学 》 2000 SCI 北大核心 CSCD

摘要：应用AFS-2201型双道原子荧光光谱仪进行了氢化物发生原子荧光法测定食品和饲料中铅的研究。方法中采用高氯酸做介质，并对各种最佳分析条件进行了探讨和验证。方法的检出限为0．3μg/L，线性范围为1．00～500μg/L，回收率为87％～98％。用标准物质进行对照，其测定值均在给定的标准值范围之内。该方法操作简单、快速，灵敏度高，精密度和准确度好，线性范围宽，检出限低，所用试剂无毒性，且仪器性能稳定，价格低廉，便于推广应用。

关键词： 氢化物发生原子荧光法 食品 饲料 铅

中华鲟(Acipenser sinensis)间的长度变异与个体内的长度异质性

张四明; 邓怀; 汪登强; 张亚平; 吴清江; 《遗传学报 》 1999 SCI 北大核心 CSCD

摘要：用PCR技术扩增中华鲟（Acipensersinensis）线粒体DNA（mtDNA）控制区（D－loop）时，发现中华鲟天然群体内存在个体间和个体内的mtDNA长度变异现象。DNA测序表明，长度变异发生在mtDNAryloop靠近tRANpro的位置，由长约82碱基对（bp）的重复序列串联形成的。由个体内mtDNA长度变异造成的异质性个体比例为57.4％，非异质性（同质性）个体的比例为426％。非异质性个体间的mtDNA的大小也不一样，存在长度变异。在非异质性个体中，有2、3、4、5个串联重复序列形成的4种分子类型的情况，其重复序列出现的频率从高到低的循序是3→2→4→5。在异质性个体中，同一个体由2种不同分子组合的异质体最普通，占77.78％3种不同分子组合的频率次之，占18.520。4种不同分子组合的异质体比例最少，占3．70％。没有发现由5种不同分子组合的异质体。对所有异质体混合分析表明，各种类型的重复序列出现的比例与非异质体的类似，即分子大小（含重复序列数）从高到低的顺序为3→2→4→5→1。对47尾中华鲟的个体内和个体间的遗传多样性指数分析发现，有65．3％遗传变异表现在群体内的个体间，有347％的遗传变异表现在个体内。由mtDNA长度异质性造成的个体内的多样性是中华鳍物种遗传多样性的另一途径。

关键词： 中华鲟 mtDNA 长度变异 异质性 串联重复 遗传多样性

柏氏鲤、镜鲤和红鲤及其杂种F_1主要形态学性状遗传的比较研究

沈俊宝; 严云勤; 《遗传学报 》 1987 SCI

摘要：通过柏氏鲤和镜鲤、红鲤的种间杂交,比较了它们之间3个杂交组合F_1和亲本的形态学性状,观察到在鳞被、体色、头长、体高、鳃耙数等性状上,亲本与杂种F_1之间有较大的遗传差异。3个杂交组F_1的杂种指数虽都间于双亲的中间值,但各自偏向母本,且有些性状表现出超亲趋向。同时,观察到由于杂交的互补作用,杂种F_1不仅组合了某些有利的形态学性状,而且提高了杂种的有关经济性能。如红柏F_1生长快于双亲;镜柏F_1和柏镜F_1的头变小,3个杂种F_1的鳃耙数增加,摄食范围扩大和起捕率明显提高等。在此基础上,如进一步用回交等选育方法,可望育成一个以浮游生物为食,起捕率高和生长快的鲤鱼新品种。

四种胡子鲇核型的比较研究

邬国民; 冼炽彬; 陈永乐; 王正询; 罗俊烈; 林兆平; 潘坤清; 《遗传学报 》 1986 SCI

摘要：本文以鱼类肾细胞为材料,用空气干燥法制备染色体标本,对四种胡子鲇的核型进行了分析和比较。观察到这几种鱼的肾细胞中都存在不同程度的罗伯逊易位和其他染色体易位的现象。在蟾胡子鲇的核型中发现有粒状染色体的存在;在四种鱼中都发现可能是XY性染色体的异型染色体。结果还表明,斑点胡子鲇的核型可能由胡子鲇的核型通过染色体罗伯逊易位进化而来,而蟾胡子鲇的核型则是这四种鱼中最原始的一种。