科研产出
高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒野毒株持续性感染细胞模型的建立
《华北农学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：旨为建立高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)野毒株持续性感染细胞模型。通过将HP-PRRSV野毒株JX143感染Marc-145细胞,感染的细胞经连续传代35代,建立了稳定的PRRSV持续感染的细胞模型,获得了JX143-Marc-145-P35细胞株。应用RT-PCR、免疫荧光、空斑形态分析等技术跟踪观察了JX143-Marc145细胞株连续传代过程中病毒在细胞内的存在和生物学特性的变化。为了进一步分析病毒持续性感染过程中基因的特征性变化,通过RT-PCR扩增出JX143-Marc145-P35的全基因,并进行测序和序列分析。结果表明,在细胞模型建立的过程中,细胞病变(Cytopathic effect,CPE)的产生经历了从慢到快又到慢的过程,RT-PCR检测和免疫荧光证实JX143-Marc-145细胞中PRRSV持续稳定存在,表现出病毒持续感染的基本特征。该细胞与正常的Marc145细胞相比,细胞周期无显著差异,但JX143-Marc-145-P35的空斑形态与亲本病毒JX143相比略大。通过序列比较分析,JX143-Marc-145-P35v与亲本猪JX143的同源性为99.4%,存在38个非同义突变,其中,31个位于非结构蛋白,7个位于结构蛋白。试验成功建立了稳定的PRRSV持续性感染细胞模型,细胞周期与正常细胞无显著差异,但病毒在持续性感染过程中无论是基因还是表型都发生了变异,且在体外持续性感染建立的过程中,对于氨基酸突变的选择压力很可能施加于病毒的非结构蛋白和主要糖蛋白。该模型的建立对深入研究病毒与细胞间的相互作用,尤其是PRRSV持续性感染的机制具有重要意义。
关键词： 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 持续性感染 细胞模型
江苏城乡统筹发展现状分析及对策
《江苏农业科学 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：对江苏城乡居民的收入和消费情况进行对比,并利用SWOT分析方法考察了江苏城乡统筹发展的现状。结果表明,当前江苏城乡一体化程度亟需提高。此外,还比较了苏南、苏中、苏北城乡统筹的发展阶段,在此基础上,提出了促进江苏快速实现城乡统筹发展的对策。
全文链接
请求原文
饲粮肌苷酸对雪山草鸡胴体品质、肉质性状及血清中生化指标的影响
《江苏农业学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：选取健康的1日龄雪山草鸡公雏1 500羽为试验材料,试验共设5个处理,分别为基础饲粮处理(对照)、基础饲粮+0.05%肌苷酸处理、基础饲粮+0.10%肌苷酸处理、基础饲粮+0.20%肌苷酸处理、基础饲粮+0.30%肌苷酸处理,研究不同肌苷酸添加量对雪山草鸡胴体品质、肉质性状及血清中生化指标的影响。结果显示,与对照相比,基础饲粮+0.20%肌苷酸处理的雪山草鸡胸肌率显著提高(P<0.05),基础饲粮+0.30%肌苷酸处理的70日龄胸肌和40日龄腿肌中肌苷酸沉积量显著提高(P<0.05),基础饲粮+0.10%和基础饲料+0.30%肌苷酸处理的40日龄雪山草鸡血清中酸性磷酸酶的活性显著提高(P<0.05),基础饲粮+0.20%肌苷酸处理的40日龄雪山草鸡血清中甘油三酯含量显著下降(P<0.05),基础饲粮+0.10%肌苷酸处理的70日龄雪山草鸡血清中葡萄糖及高密度脂蛋白胆固醇含量显著提高(P<0.05)。
全文链接
请求原文
引起茄子黄化萎蔫病原菌的分离与鉴定
《江苏农业科学 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：采用病原形态学观察、接种致病性测定及分子鉴定的方法对引起南京地区黄化萎蔫茄子的病原菌进行了分离与鉴定。结果发现,从茄子黄化萎蔫植株上分离得到了2种病原菌:菌株VW003在PDA培养基上呈黑色圆形轮纹状,分生孢子呈卵圆形,经回接试验确定该菌为引起茄子黄萎病的大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)。菌株FW007经培养的气生菌丝呈白色絮状,小型分生孢子团生,卵圆形至椭圆形,大型分生孢子呈镰刀形;接种健康幼苗后也可引起植株黄化、萎蔫和死亡;利用真菌ITS通用引物对菌株FW007的基因组DNA进行PCR扩增,经测序鉴定与GenBank中尖孢镰刀菌菌株的ITS序列(登录号AY928409和JN107739)一致性高达99%,进一步确定菌株FW007为镰刀属尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。以上结果表明大丽轮枝菌和尖孢镰刀菌均可导致茄子的黄化萎蔫,且分别由这2种病原菌引起的茄子黄萎病和枯萎病通常伴随发生。
全文链接
请求原文
高效液相色谱-紫外法同时检测小麦中DON、15ACDON和3ACDON
《作物学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：建立了测定小麦中B型单端孢酶烯族毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3-acetyldeoxynivalenol,3-ACDON)和15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(15-acetyldeoxynivalenol,15-ACDON)的高效液相色谱-紫外(HPLC-UV)检测方法。用水提取小麦样品,提取液经无水乙醇等体积沉淀,再结合OasisHLB固相萃取小柱可取得较好的净化效果。采用乙腈-0.005%磷酸水溶液二元梯度洗脱程序在高效液相色谱-紫外检测器上完成DON、15ACDON和3ACDON的定性定量分析。结果表明,在0.5～15.0mgL-1线性范围内,DON、15ACDON和3ACDON的平均加标回收率分别为89.8%、93.4%和92.9%,相对标准偏差分别为2.2%、2.0%和2.5%(n=3);检测限分别为12.2、10.5和16.7μgkg-1。该方法准确、重现性好,样品净化方法使杂峰干扰少,大幅减少有机溶剂的使用,成本低,适用于小麦中B型单端孢酶烯族毒素的大批量检测。
关键词： 小麦 B型单端孢酶烯族毒素 高效液相色谱-紫外检测法
全文链接
请求原文
一个大豆GmXIP基因的克隆与表达分析
《华北农学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：XIP(X Intrinsic Protein)亚家族蛋白作为水通道蛋白AQP(Aquaporin)的一个成员,最近在不同植物的基因组或表达序列标签(EST)文库中被鉴定出来。从前期通过Perl程序下载的大豆全基因组水通道蛋白序列中鉴定了一个大豆GmXIP基因,该基因含有一个长385 bp的内含子,且剪接方式是AG/AG,不同于植物普通的GT/AG剪接模式;与其他植物的XIP蛋白的氨基酸序列比对发现该蛋白也具有6个跨膜区,但MIP(Major Instrinsic Protein)家族蛋白保守的"NPA"基序突变为"NPI"和"SPA",暗示该蛋白负责的物质运输与其他植物XIP功能不同;半定量RT-PCR结果表明,该基因在叶和荚表达较弱外,在茎和叶部位的表达较强,而且随着植株的发育,在茎中的表达渐强,叶中则一直保持较高的表达,这表明该基因在营养物质的运输和供给过程中起着关键作用;同时根部组织在盐胁迫8 h时该基因表达达到了顶点,36 h时恢复到处理前的表达水平;利用发根农杆菌注射获得过表达GmXIP组合植株于干旱和盐胁迫处理后发现,该基因过表达后植株抵抗外界非生物胁迫的耐性大大降低,这暗示该基因的过表达可能增进了植物细胞的失水速度,导致植株死亡。这些研究为明确大豆XIP基因的结构和功能提供了理论支持和技术指导。
全文链接
请求原文
肠出血性大肠杆菌O157∶H7 toxB基因缺失株的构建
《江苏农业学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：为了明确肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157∶H7大质粒pO157编码的蛋白质ToxB与O157∶H7在肠道黏附、定殖的关系,构建含有toxB基因同源臂的重组自杀性质粒pMEG375-BN-Kan-BC,转化SM10宿主菌获得重组SM10(pMEG375-BN-Kan-BC)。将SM10(pMEG375-BN-Kan-BC)与O157∶H7进行混合培养,通过同源重组,获得杂交toxB基因缺失株。用体外接种的HEp-2细胞和体内感染链霉素处理的小鼠,明确缺失株黏附定殖能力。经PCR和Western blot鉴定,toxB基因被卡那霉素(Kan+)选择标记基因表达盒所代替。O157∶H7(△toxB)生长特性与亲本株相比无明显差异。O157∶H7(△toxB)与亲本株相比,对HEp-2细胞的黏附能力降低了2倍。口服感染小鼠后,O157∶H7(△toxB)第3 d粪便排菌量仅为3.1×105 CFU,持续排菌11 d;而亲本株排菌量高达4.03×107 CFU,持续排菌时间超过14 d。
关键词： 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 toxB基因 缺失株 小鼠 黏附
全文链接
请求原文
