科研产出
猪瘟病毒E2蛋白在大肠杆菌中的表达及免疫原性分析
《河南农业科学 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：为制备具有免疫原性的猪瘟病毒E2蛋白,在大肠杆菌中表达E2蛋白,并对其进行纯化及免疫原性分析。将E2基因插入原核表达载体p ET-28a,构建重组质粒p ET-28a-E2,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot分析结果显示,成功表达了可溶性E2蛋白。对IPTG浓度及诱导温度和时间进行优化,结果显示,IPTG终浓度为0.1 mmol/L时,18℃条件下诱导表达16 h,E2蛋白的可溶性表达量最高。通过分子筛一步纯化E2蛋白,其终质量浓度为0.5 g/L。Western blot分析和间接ELISA结果显示,纯化后的E2蛋白在变性及非变性条件下都能够被猪瘟阳性血清特异性识别,表明纯化后的E2蛋白活性良好。将纯化后的E2蛋白添加弗氏佐剂乳化后免疫BALB/C小鼠,采集血清进行病毒中和试验,结果显示,免疫后56 d产生较高水平的中和抗体,表明E2蛋白免疫原性良好。综上,成功利用大肠杆菌BL21(DE3)菌株表达了可溶性E2蛋白,且纯化后的E2蛋白免疫原性良好。
关键词： 猪瘟病毒 E2蛋白 蛋白质纯化 血清学分析 免疫原性
全文链接
请求原文
盆栽试验中施用外源生长调节剂对烤烟TSNAs生物合成的影响
《烟草科技 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：为明确外源生长调节剂Z5[由生长素(IAA)、水杨酸(SA)和萘乙酸(NAA)配置而成]影响烟草特有亚硝胺(Tobacco-specific N-nitrosamines,TSNAs)生物合成的生理机制,在湖北省恩施土家族苗族自治州建始县试验基地设置叶面喷施Z5盆栽试验,以清水为对照,分析了烟株硝酸盐与亚硝酸盐含量(质量分数)、硝酸还原酶(NR)与烟碱合成关键酶活性的动态变化以及相关基因的表达量,并测定了烤后烟叶TSNAs和常规化学成分含量(质量分数)。结果表明,烤烟打顶后喷施Z5的烟叶TSNAs含量显著降低,上部叶和中部叶中TSNAs含量降低幅度分别为20.1%和12.4%,而烟叶化学成分含量在适宜范围内。外源生长调节物质降低TSNAs含量的作用机制,一是下调了控制NR活性的基因NR的表达,烟株打顶后第1天NR基因的相对表达量下调55.0%,NR活性受抑制,导致硝酸盐向亚硝酸盐的转化减少,叶片中亚硝酸盐的积累量降低;二是下调了控制烟碱合成关键酶基因的相对表达量,烟株打顶后第1天ADC、QPRT、ODC及PMT基因相对表达量分别下调82.1%、69.8%、91.8%和76.0%,使烟碱合成关键酶活性降低,从而减少了烟碱的合成,上部叶和中部叶烟碱含量下降幅度分别为23.5%和22.9%。
关键词： 烤烟 外源生长调节物 烟草特有亚硝胺 烟碱 亚硝酸盐
全文链接
请求原文
微量元素对蝴蝶兰生长发育及光合生理的影响
《河南农业科学 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：为改善蝴蝶兰的光合性能,促进生长,以蝴蝶兰中国红为试验材料,研究了Fe、Mn、Zn、Cu对蝴蝶兰营养生长及光合生理的影响。结果表明:Fe、Mn、Zn、Cu 4种微量元素对蝴蝶兰的叶片生长、叶绿素含量及光合性能都有一定的促进作用。气孔导度越大,其蒸腾速率越高。其中,Cu(0.02 mg/L)提高实际光合效率效果最显著,其处理叶片数也最多,其次是Zn;Fe对蝴蝶兰的叶绿素含量和CO_2净吸收速率作用效果最大;Zn对气孔导度、蒸腾速率和胞间CO_2浓度的作用最明显,较清水对照分别提高了29%、24%和23%。
全文链接
请求原文
龙须菜对异育银鲫生长、体组成及营养代谢的影响
《河南农业科学 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：为评价龙须菜藻粉作为饲料原料替代异育银鲫饲料中菜粕的可行性,以不含龙须菜的基础饲料饲喂对照组,以含3%(D1)、6%(D2)、9%(D3)、12%(D4)、15%(D5)的龙须菜替代菜粕配制成的饲料饲喂试验组,所有饲料均等氮等脂,异育银鲫幼鱼规格一致[体质量(8. 21±0. 12) g],每组3个重复,每个重复25尾试验鱼,饲喂8周后,测定试验鱼生长性能、饲料表观消化率、鱼体成分、营养代谢等相关指标。结果表明,与对照组相比,D1组试验鱼饲料转化率、蛋白质效率、肝脏谷丙转氨酶活性分别升高7. 41%(P <0. 05)、8. 48%(P <0. 05)、11. 34%(P <0. 05); D1、D2组饲料干物质表观消化率分别升高3. 94%(P <0. 05)、3. 78%(P <0. 05); D2组血清胆固醇含量升高9. 84%(P <0. 05); D4、D5组异育银鲫的粗脂肪表观消化率分别下降2. 58%(P <0. 05)、2. 69%(P <0. 05),甘油三酯含量分别下降18. 67%(P <0. 05)、11. 20%(P <0. 05); D5组异育银鲫的脏体比、血清总蛋白含量和全鱼粗脂肪含量分别下降8. 43%(P <0. 05)、8. 26%(P <0. 05)和5. 72%(P <0. 05),摄食率、血清谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性分别升高3. 74%(P <0. 05)、5. 30%(P <0. 05)和7. 82%(P <0. 05)。回归分析表明,随着龙须菜替代量的增加,试验鱼全鱼粗脂肪含量呈下降趋势。综上,饲料中适量添加龙须菜能促进异育银鲫的生长,用龙须菜藻粉替代异育银鲫饲料中的菜粕是可行的,以添加3%的量效果较好。
全文链接
请求原文
农杆菌介导的花生遗传转化条件优化
《中国油料作物学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：为建立花生快速高效的遗传转化体系,以浸泡吸水后的花生半粒种子为转化受体,利用根癌农杆菌介导法,以除草剂Basta抗性筛选及基因组DNA的bar基因PCR检测为指标,优化花生遗传转化体系。研究结果表明,在侵染悬浮液中加入1mmol/L二硫苏糖醇(DTT)提高了农杆菌介导的转化效率(最高提升36.5%);与YEB培养液相比,AB重悬液的使用显著提高了农杆菌的转化效率(最高提升19.3%);农杆菌菌液OD_(600)为0.7时转化效率最高;基因型显著影响转化效率,EXP27-1516的转化效率为69.03%,显著高于14AU01(56.67%);以花生半粒种子为转化受体,从种子培养到形成茁壮根系仅需8周,明显短于子叶节转化所需的13周。优化后的农杆菌介导的花生遗传转化体系为花生转基因研究提供了重要的研究工具。
关键词： 花生 遗传转化体系 半粒种子 二硫苏糖醇(DTT) AB重悬液
全文链接
请求原文
蝴蝶兰腋芽增殖过程中的转录组特性
《基因组学与应用生物学 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：蝴蝶兰在种苗生产中主要是以腋芽再生的方式进行繁育。本研究以大辣椒、四季春2个蝴蝶兰品种为试材,利用Illumina Hi Seq-(TM)2000平台对他们在组织培养过程中3个诱导增殖阶段的转录组进行了测序。结果表明,测序共获得52.77 Gb的Clean Data,6个样品的Clean Data平均达到了6.78 Gb。对Clean Data进行过滤并组装,共获得86130条Unigenes;其中长度在1 kb以上的Unigenes有16723条。参照无参基因组在数据库中进行比对分析,其中28430条Unigenes可进行有效注释。对2个品种、3个诱导增殖阶段的全部Unigenes进行SNP分析表明,四季春的杂合性SNP分布密度明显低于大辣椒品种。另外,对转录组数据进行了差异表达基因分析,共获得了7638条差显基因。
全文链接
请求原文
不同营养水平水培条件下幼苗期大豆下胚轴性状QTL定位与上位互作分析
《核农学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：为探究不同氮磷钾水平对大豆幼苗期下胚轴性状的影响,发掘其基因资源,了解其遗传机制,本试验以栽培大豆晋豆23为母本,以山西农家品种灰布支黑豆为父本及其所衍生的447个重组自交系(RIL)为材料,设置3个处理:CK(模拟种植不施肥)、T1(模拟大田正常配施氮磷钾肥)和T2(模拟高肥田块,含量为大田常规配施氮磷钾肥的1.5倍),研究不同营养水平水培条件下幼苗期大豆QTL间的上位性和环境互作效应。结果表明,基于复合区间作图(CIM)共检测到20个影响下胚轴长和下胚轴重的QTL,分布于第2、第6、第7、第8、第9、第10、第13、第16、第20共9条染色体上,单个QTL的贡献率介于3.65%~18.13%之间。基于混合线性模型(MCIM)检测到3对下胚轴长上位互作QTL,2对下胚轴重上位互作QTL,5对QTL均发生在2个非主效QTL之间。第9和第10染色体分别在3种处理中同时检测到下胚轴长和下胚轴重QTL,表明加性效应、加性与环境互作效应和加性×加性上位性互作效应在下胚轴长和下胚轴重的形成和遗传中起重要作用。本研究为大豆幼苗期下胚轴性状的QTL定位、图位克隆和分子标记辅助选择以及为实际生产中苗期施肥时间的选择和氮磷钾高效利用提供了一定的理论参考。
全文链接
请求原文
分子伴侣对A型FMDV结构蛋白VP1在大肠杆菌中可溶性表达的促进作用
《河南农业大学学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：为获得具有活性的A型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)VP1蛋白,以重组质粒pUC57-MM-VP1为模板,利用PCR扩增得到A型FMDV VP1基因片段,并将该片段插入原核表达载体pET-28a构建重组质粒pET-28a-MM-VP1;之后将该质粒转入E.coli BL21(DE3)进行诱导,同时对诱导温度进行了优化。SDSPAGE显示,最佳诱导温度为18℃,VP1蛋白主要以包涵体形式高效表达;为了提高VP1蛋白可溶性表达,将重组质粒pET-28a-MM-VP1与pTF16共同转入E.coli BL21(DE3)进行诱导表达,并对表达条件进行优化。结果表明,分子伴侣有效提高了A-VP1重组蛋白的可溶性表达量,诱导最佳条件为18℃、0.1 mmol·L~(-1)IPTG、2 g·L~(-1)阿拉伯糖、诱导时间20 h。Western-Blot结果表明,得到的重组蛋白能够被抗FMDV的阳性血清识别,反应原性良好。
全文链接
请求原文
猪2′,5′寡腺苷酸合成酶OAS1a基因克隆与序列分析及其在Marc-145细胞上对PRRSV复制的影响
《中国兽医学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：旨在探索猪2′,5′寡腺苷酸合成酶OAS1a对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS)的复制是否有抑制作用,进而为探索抑制病毒复制寻求新的思路。从PAM猪肺泡巨噬细胞中克隆了猪2′,5′寡腺苷酸合成酶OAS1a基因,将该基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,测序与序列分析之后将该基因转染Marc-145细胞,然后接种PRRSV病毒,与对照组比较病毒的抑制效果。结果显示,病毒的滴度明显下降,病毒的RNA水平也明显下降,由此推断猪2′,5′寡腺苷酸合成酶OAS1a可以在Marc-145细胞上抑制PRRS的复制。
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 2′,5′寡腺苷酸合成酶OAS1a 序列分析 滴度 Marc-145细胞
全文链接
请求原文
渍害胁迫对芝麻籽粒及制油品质的影响
《华北农学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：为了研究渍害胁迫对芝麻籽粒及制油品质的影响,以豫芝11号等6个芝麻品种为材料,在芝麻生长-盛花期时,采用耐渍池分别进行0,36 h的连续淹水处理,成熟后收集芝麻籽粒,并从籽粒的外观、营养组分、矿物质及油制品等方面进行深入的品质分析。结果表明,渍害胁迫处理后,不同品种的芝麻籽粒种皮颜色变深,瘪粒增多,降低了芝麻的商品价值,但不改变芝麻籽粒的长度和宽度,其平均值分别在3.00,1.80 mm左右。渍害胁迫使籽粒中的营养成分粗脂肪、粗蛋白、总糖含量存在不同程度的变化,其变化幅度分别为-3.73%~2.03%,-0.10%~-2.16%,-0.93%~5.80%;同时也导致了粗纤维和灰分含量的增加。胁迫处理使矿物质元素Ca、K、Mg、Na含量存在不同程度的变化。其中Ca元素随着品种不同,不存在规律一致的变化。但是K、Mg、Na含量均呈升高趋势。芝麻油制品的变化则主要表现在酸值和过氧化值基本呈升高趋势(品种M5的过氧化值例外),油酸、亚油酸和棕榈酸含量无显著性变化,花生酸、亚麻酸、棕榈油酸含量存在一定变化,微量成分芝麻素、芝麻林素含量的变化因品种而异。
全文链接
请求原文
