响应面法优化香菇柄酒精发酵工艺

魏书信; 刘丽娜; 崔国梅; 许方方; 李顺峰; 田广瑞; 《中国酿造 》 2019 北大核心

摘要：为充分利用香菇产业副产物香菇柄,该研究以香菇柄为原料发酵制备酒精,并优化其发酵工艺条件。先通过Plackett-Burman试验研究影响酒精度的8个因素,并筛选出3个具有显著影响的因素;再通过最陡爬坡试验确定3因素的最适范围;最后利用BoxBehnken试验进行香菇柄酒精发酵工艺优化。结果表明:香菇柄粉添加量、发酵温度、初始pH值3因素对香菇柄酒精发酵影响最大,优化的发酵工艺参数为:香菇柄根粉用量3.7%、发酵温度31℃、初始pH值7.3、原料粉碎度60目、磷酸二氢钾添加量0.15%、葡萄糖添加量22%、酿酒曲接种量0.3%、发酵时间72h。在此优化条件下,平均酒精度为11.32%vol。

关键词： 香菇柄 酒精 发酵 工艺优化 Plackett-Burman试验设计 响应面法

 全文链接 请求原文

猪细胞因子信号传导抑制因子1蛋白的表达纯化与多克隆抗体制备

夏爽飞; 陈鑫鑫; 乔松林; 柴书军; 罗雪刚; 谢莎; 张改平; 《中国兽医科学 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：为制备猪细胞因子信号传导抑制因子1(SOCS1)的多克隆抗体,采用RT-PCR扩增猪SOCS1基因序列,将其克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达载体pET28a-pSOCS1,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,在不同温度、IPTG浓度、诱导时间等条件下进行表达,确定最佳表达条件,并对重组蛋白pSOCS1进行纯化。以表达的重组蛋白pSOCS1免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,经4次免疫,间接ELISA测得抗体效价达到1∶51 200。Western-blot和间接免疫荧光试验结果表明,该多克隆抗体可与pSOCS1重组蛋白和经HEK293T细胞过表达的pSOCS1蛋白发生特异性反应,证明pSOCS1重组蛋白免疫原性良好。本研究为后续制备单克隆抗体、研究猪SOCS1相关作用机制奠定了基础。

关键词： 猪SOCS1 生物信息学分析 原核表达 多克隆抗体

 全文链接 请求原文

黄曲霉毒素B_1单克隆抗体的制备及基于该抗体的黄曲霉毒素B_1免疫学检测方法的建立

姚静静; 胡骁飞; 韩俊岭; 徐帆; 滕蔓; 邢云瑞; 孙亚宁; 邓瑞广; 张改平; 《动物营养学报 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：为了快速准确检测粮食与饲料中黄曲霉毒素B_1(AFB_1)含量,本试验制备了具有高灵敏度的AFB_1单克隆抗体,并将其应用于AFB_1间接竞争酶联免疫吸附测定(ELISA)方法的建立。采用碳二亚胺(EDC)法制备AFB_1完全抗原[AFB_1-牛血清白蛋白(BSA)和AFB_1-鸡卵白蛋白(OVA)],并免疫B_ALB/c小鼠。经细胞融合,筛选出能够分泌高灵敏度AFB_1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法,大量制备AFB_1单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。基于制备的AFB_1单克隆抗体,建立AFB_1间接竞争ELISA检测方法。结果显示:通过筛选,获得稳定产生抗体的杂交瘤细胞株9H1F5,经间接ELISA方法测定,获得的AFB_1单克隆抗体的效价高达5.12×105,亲和力常数(Ka)=6.72×107L/mol,抗体亚型为免疫球蛋白G_2(IgG_2)。采用间接竞争ELISA方法测得AFB_1的半数抑制浓度(IC_(50))为0. 232 ng/mL,检测范围为0.014～1.920 ng/mL,最低检测限为0.014 ng/mL。同时,该AFB_1单克隆抗体与黄曲霉毒素B_2(AFB_2)、黄曲霉毒素G_1(AFG_1)、黄曲霉毒素G_2(AFG_2)、黄曲霉毒素M1(AFM1)的交叉反应率分别为40.21%、33.19%、31.96%、4.40%,与其他霉菌毒素无交叉反应。由上述结果可知,本试验成功制备了灵敏度高、特异性强的AFB_1单克隆抗体,并基于该抗体建立了检测AFB_1的间接竞争ELISA方法,为粮食与饲料中AFB_1快速免疫学检测奠定了基础。

关键词： 黄曲霉毒素B_1 细胞融合 单克隆抗体 ELISA

 全文链接 请求原文

豫南地区白菜-西瓜-甘蓝一年三熟高效栽培技术

王志勇; 高冠英; 赵艳艳; 原玉香; 张晓伟; 杨爱军; 魏小春; 杨双娟; 《北方园艺 》 2019 北大核心

摘要：新野县地处河南省南阳盆地,土层深厚,温暖湿润,四季分明,光、热、水资源丰富,是全国优质蔬菜生产基地示范县,也是河南省露地蔬菜生产最大县,蔬菜种植面积稳定在2万hm2。该区菜农采用的白菜-西瓜-甘蓝一年三熟高效栽培模式,667m2总产值达12 000元,纯收入近10 000元,目前发展到近1 000km2,因其投入较少,是当地农民收益较高的种植模式。

 全文链接 请求原文

北方春玉米区亚洲玉米螟对Bt玉米的抗性风险分析

黄运新; 封洪强; 吴孔明; 《植物保护学报 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：为了解我国北方春玉米区种植Bt玉米条件下主要靶标害虫亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis的Bt抗性风险,探索合理的Bt玉米种植比例,根据亚洲玉米螟的特点构建种群动态与遗传模型,对不同的Bt玉米种植比例进行分析评估。结果显示,当以种子混合种植75%的Bt玉米+25%的非Bt玉米庇护所时,亚洲玉米螟的种群控制时间,即亚洲玉米螟种群密度下降到每百株玉米植株30头幼虫以下的时间,为1～2年,而害虫的抗性时间,即亚洲玉米螟种群抗性基因频率达到50%的时间,在1代区为40年、在2代区为20年。当以种子混合种植20%、15%、10%、5%的非Bt玉米庇护所时,亚洲玉米螟的种群控制时间仍为1～2年,而害虫的抗性时间缩短,在1代区分别是29、21、15、9年,在2代区分别是14、10、7、4年。表明在研究区域内以种子混合种植20%以上的非Bt玉米庇护所可维持对亚洲玉米螟的Bt抗性管理至少14年。

关键词： Bt玉米 亚洲玉米螟 种群控制 抗性演化 模型分析

 全文链接 请求原文

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白单抗的制备与鉴定

黄晓静; 李睿; 乔松林; 杨艳艳; 邓瑞广; 张改平; 《中国兽医科学 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：为制备及鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)主要结构糖蛋白GP5单克隆抗体,本研究首先利用切向流系统和琼脂糖凝胶层析对PRRSV高致病性毒株HN07-1进行纯化;将纯化后的病毒作为免疫原免疫小鼠;取免疫后的小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞进行融合;通过免疫过氧化物酶单层细胞试验对杂交瘤细胞株进行检测及筛选;利用重组GP5蛋白对阳性单克隆上清进行免疫印迹分析鉴定;经激光扫描共聚焦显微术和流式细胞术进一步鉴定单抗与病毒的结合特性.本研究共筛选到4株针对GP5蛋白的单克隆抗体,分别被命名为2D1G11、2D1C1、4H9D1和8B9D4;通过激光共聚焦显微镜观察发现,以上这4株GP5单抗均可以与病毒特异性结合;进一步通过流式细胞术检测发现,这4株GP5单抗与病毒的结合能力超过N单抗.通过亚型鉴定发现,2D1G11、2D1C1属于Ig G2亚型,4H9D1、8B9D4为Ig G1亚型.PRRSV GP5蛋白特异性单抗的成功制备,为PRRSV快速诊断试剂研制及免疫识别研究提供了分子手段和工具支持.

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5 单克隆抗体

 全文链接 请求原文

烟草疫霉菌拮抗细菌的筛选鉴定及发酵条件优化

李小杰; 李成军; 刘红彦; 邱睿; 赵辉; 陈玉国; 胡亚静; 刘畅; 白静科; 李淑君; 《中国烟草科学 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：为了筛选对烟草疫霉菌具有拮抗作用的生防细菌菌株,本研究从烟草黑胫病病圃地采集健康烟株的根际土样,采用对峙培养法筛选得到8株对烟草黑胫病具有拮抗作用的细菌菌株,其中编号为LB-9的菌株对烟草疫霉菌的抑制作用最强且效果稳定,抑菌率为60.6%,且抑菌谱广,对其进行16S rRNA基因序列分析后将该菌株鉴定为多粘芽孢杆菌。采用单因素优化试验初步探究了多粘芽孢杆菌LB-9的最适发酵条件,明确了LB-9的最适发酵培养基、最适发酵温度、最适发酵时间和最适发酵初始pH值,对其生防制剂的开发应用具有重要意义。

关键词： 烟草疫霉 拮抗细菌 筛选鉴定 发酵条件

 全文链接 请求原文

抗猪瘟病毒中和性单克隆抗体的制备与鉴定

刘运超; 陈玉梅; 冯丽丽; 汪磊; 王聚财; 陆东峰; 张改平; 《河南农业科学 》 2019 北大核心

摘要：为了获得具有中和活性的抗猪瘟病毒(CSFV)单克隆抗体,分别将CSFV和杆状病毒表达系统表达纯化的CSFV E2蛋白与佐剂混合后免疫BABL/c小鼠,经杂交瘤细胞融合制备抗CSFV单克隆抗体,经过多轮亚克隆和免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)筛选,成功获得5D1、8H7、9A1和13B2共4株能够稳定分泌抗CSFV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。4株单克隆抗体轻链均属于κ型,其中5D1、8H7、13B2为IgG1亚型,9A1为IgG2c亚型。间接ELISA检测结果显示,4株单克隆抗体的腹水效价在2.56×10~5～1.02×10~6;IPMA效价分别为6.40×10~4、1.28×10~5、2.56×10~5、1.28×10~5;SDS-PAGE和Western blot检测结果显示,4株单克隆抗体均能与经原核表达系统及杆状病毒表达系统获得的CSFV E2蛋白发生特异性反应;IPMA检测结果显示,4株单克隆抗体均能与CSFV发生特异性反应,而与牛流行性腹泻病毒(BVDV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒(PCV2)均无交叉反应。病毒中和试验证实,单克隆抗体13B2具有中和活性,其中和效价为1.28×10~4。综上,成功筛选出4株能够分泌抗CSFV特异性抗体的杂交瘤细胞株,其中单克隆抗体13B2具有中和CSFV感染活性。

关键词： 猪瘟病毒 E2蛋白 中和性单克隆抗体 抗体中和效价 免疫过氧化物酶单层细胞试验

 全文链接 请求原文

猪流感病毒NP蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

李鸽; 刘肖; 李青梅; 杨艳艳; 王彦红; 张改平; 《河南农业科学 》 2019 北大核心

摘要：为了制备猪流感病毒(SIV)核蛋白(NP)的单克隆抗体(MAb),采用差速离心法纯化H1N1和H3N2亚型SIV后交叉免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过建立的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)单克隆抗体检测方法进行筛选。获得3株能稳定分泌抗NP蛋白的杂交瘤细胞,分别命名为16D5、18G8和20C4,将它们诱导小鼠产生的腹水IPMA效价分别为1×10~(-6)、1×10~(-6)和1×10~(-5)。亚型鉴定结果显示,3株单克隆抗体的重链均为IgG1,轻链为κ链。3株单克隆抗体特异识别H1N1、H3N2、H5N1、H7N9和H9N2亚型流感病毒,并且与猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒无交叉反应。Western blot检测结果表明,3株杂交瘤细胞培养上清均在56 ku附近出现一条特异性的蛋白质条带,说明针对SIV的NP蛋白制备了3株单克隆抗体。综上,成功制备了针对SIV NP蛋白的3株单克隆抗体,可识别不同亚型的SIV。

关键词： 猪流感病毒 免疫过氧化物酶单层细胞试验 NP蛋白 单克隆抗体

 全文链接 请求原文

郑196耐大豆胞囊线虫病研究及耐病机理初探

练云; 雷晨芳; 王树峰; 王庭峰; 张辉; 卢为国; 《分子植物育种 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：郑196是从黄淮海大豆产区选育的优良大豆品种。该品种在SCN2病圃中鼓粒情况良好;2017年,郑196在黄淮海9个试点的产量与在SCN2病圃中产量相比较,差异不显著,说明该品种具有耐SCN病的特性;利用荧光定量PCR,进一步分析来自Rhg1/Rhg4位点的4个SCN-抗性基因(Glyma18g02580, Glyma18g02590, Glyma18g02610, SHMT)在郑196及其他不同抗性水平大豆中的表达,结果表明:在受到SCN2侵染的0～25 d,4个SCN-抗性基因在抗病材料中的表达量均持续提升;在受到SCN2侵染的10 d/15 d,这4个SCN-抗性基因在郑196及感病材料中表达量达到最高点,之后表达量下降,该结果表明,郑196的耐SCN病机理不同于SCN抗性基因在抗病材料中的抗病机理,其耐病性不是由SCN抗性基因单独调控的,有可能存在其特有的耐病通路或是由抗性基因与耐病基因共同调控其耐病机制。本研究可对抗SCN种质资源创新和抵御SCN策略提供参考依据。

关键词： 大豆 郑196 大豆胞囊线虫 耐病机理

 全文链接 请求原文