科研产出
水稻品种抗南方水稻黑条矮缩病人工接种鉴定技术规程
《江苏农业科学 》 2021 北大核心
摘要：南方水稻黑条矮缩病是我国一类农作物病虫害,严重威胁水稻生产和粮食安全.种植抗(耐)病品种是防控该病害的有效措施,但对水稻品种的抗病性评价至今尚未有具体操作规程可循.针对水稻品种抗病鉴定评价及抗源筛选的迫切需求,作者在多年实践的基础上,总结制定了抗南方水稻黑条矮缩病人工接种鉴定技术及评价规程,包括有关术语定义,人工接种鉴定流程、结果调查和抗病性评价等,为规范开展水稻品种抗病性鉴定提供指导和参考.本标准适用于水稻品种及育种材料抗南方水稻黑条矮缩病性状的鉴定与评价.
关键词： 南方水稻黑条矮缩病;接种;抗性鉴定;规程;抗病性评价;人工接种鉴定技术
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盐胁迫下四个水稻类受体蛋白激酶的功能分析
《中国水稻科学 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：【目的】盐胁迫是制约水稻生长和产量主要逆境之一,研究盐胁迫响应基因对于了解植物耐盐机理和培育耐盐水稻品种具有重要意义。类受体蛋白激酶RLK（receptor-like protein kinases）广泛参与调控植物细胞信号转导和对逆境胁迫的响应过程。本研究的目的是分析盐胁迫下四个RLK基因的表达模式和生物学功能。【方法】通过荧光定量PCR检测4个RLK基因在NaCl处理下的表达变化以及在不同组织器官中的表达情况,同时利用CRISPR/Cas9对4个RLK基因分别进行编辑。【结果】4个RLK基因的转录均受NaCl诱导或抑制,其中Os04g0275100基因和Os07g0541900基因主要在根中表达;Os09g0353200基因主要在叶片中表达;Os01g0852100基因在根、茎、叶、叶鞘中均有表达。通过测序分别筛选到4个基因的功能缺失突变体,耐盐性实验结果表明四个基因的突变体对NaCl的敏感程度与野生型一致。【结论】鉴定的4个RLK基因的转录受NaCl调控且表达具有组织特异性,突变单个RLK基因不影响水稻的耐盐性。为进一步揭示盐胁迫下RLK基因的功能和作用机制奠定了基础。
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淮稻5号化学诱变突变体库的构建与基因快速定位
《江苏农业科学 》 2021 北大核心
摘要：淮稻5号是江苏地区粳稻主栽品种之一,该品种具有灌浆速度快、出糙率高、千粒质量高、抗倒能力强、耐低温等特点。但由于缺少适宜的研究材料,淮稻5号中优良农艺性状的调控机制一直没有得到解析。突变体是研究基因功能最直接、最有效的途径之一,本研究利用N-甲基-N-亚硝脲（MNU）化学诱变构建了包含3 562个家系的淮稻5号突变体库,并从中筛选获得了512个表型稳定的突变体,包括株型、叶色、育性、抽穗期、早衰、类病斑等8种类型,利用MutMap技术完成了2个株型突变体的突变位点初步定位,该突变体库的构建及MutMap技术的应用,以期为淮稻5号优良性状的解析提供突变体资源。
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南方根结线虫中国分离群体种内变异分析
《植物保护学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为调查我国不同地区和不同寄主上的根结线虫Meloidogyne spp.种类分布以及群体变异情况,基于酯酶和苹果酸脱氢酶同工酶图谱及SCAR分子标记技术对2017—2019年从6省19种植物根部组织分离到的40个根结线虫群体进行鉴定,针对南方根结线虫M. incognita群体分别通过寄主鉴别法进行生理小种鉴别,利用携带Mi抗性基因的番茄进行毒力测试,对2龄幼虫的口针长度和体长进行测量,并对核糖体ITS和线粒体Nad5基因序列进行比较分析。结果显示:根结线虫分离群体经鉴定包括38个南方根结线虫群体和2个象耳豆根结线虫M. erterolobii群体;38个南方根结线虫群体中有35个群体被鉴别为1号生理小种,其余3个群体被鉴别为2号生理小种;发现1个南方根结线虫群体CN19可在携带Mi抗性基因的番茄上侵染繁殖,为毒性群体,其余群体无法进行侵染和繁殖,为无毒群体。南方根结线虫群体2龄幼虫的口针长度和体长均差异较大,而不同寄主来源分离群体的ITS和Nad5基因序列也存在一定变异。基于ITS和Nad5基因序列构建的系统发育树将所有根结线虫群体归为南方根结线虫和象耳豆根结线虫组成的2个独立分支,但不能确定南方根结线虫不同群体的分子进化与其寄主来源和地理分布之间的相关性。
关键词： 根结线虫 南方根结线虫 象耳豆根结线虫 鉴定 种内变异 生理小种 同工酶图谱
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水稻用药策略风险评估与安全性分析
《南京农业大学学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：[目的]本文旨在对水稻全生育期使用的农药进行膳食暴露风险评估和土壤生态环境影响分析,以评估农药使用策略的合理性。[方法]对江苏省、江西省单季稻-双季稻种植区的农药使用情况及其在稻米和土壤的残留情况进行长期调查,对减施农药示范区和常规施药对照区的稻米和不同生育期（分蘖期、抽穗期和收获期）的稻田土壤进行残留监测,采用膳食暴露评估模型和生态相对风险模型（EcoRR）对急、慢性膳食暴露风险和生态环境风险进行评估。[结果]水稻上常规使用的51种农药,有4种在收获的稻米中检出,其中吡蚜酮和己唑醇具有较高的检出率,分别为93.00%和28.75%,毒死蜱和戊唑醇检出率为14.29%和7.14%。急、慢性膳食暴露风险评估表明:稻米中残留的吡蚜酮、己唑醇、毒死蜱和戊唑醇对不同年龄人群的食用安全风险较低,减施农药仍可进一步降低膳食暴露风险。对水稻不同生育期土壤中农药残留的调查表明,有13种农药在土壤中检出,其中三环唑、己唑醇和丙环唑检出率为100%,这与其较长的半衰期、使用频率以及在前茬作物的使用有关。生态风险评估表明:减施农药能够降低稻田生态环境风险,其中穗期减少吡蚜酮的施用量对稻田生态风险的降低效果最为显著,部分地区可由中等风险转变为低风险或无风险级别。生态风险贡献率分析表明:吡蚜酮的风险贡献率最高,在水稻分蘖期、抽穗期、收获期分别为54.16%～83.68%、19.07%～84.39%和0.00%～82.32%;其次是分蘖期丙草胺、抽穗期苯醚甲环唑和收获期丙环唑的使用,风险贡献率分别为0.00%～71.50%、0.00%～68.95%和1.12%～62.24%,亦是影响稻田生态风险的关键药剂。[结论]减少关键农药品种在水稻不同生长时期的使用,可以显著降低其生态环境风险,特别是吡蚜酮、苯醚甲环唑、丙环唑和丙草胺的合理使用,是调控稻田生态环境安全的关键。
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绵羊乳腺上皮细胞的分离鉴定及炎性模型的建立
《中国兽医学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：探索高效易行的绵羊乳腺上皮细胞原代培养方法并建立细胞炎性模型。分别采用组织块法、酶消化法和酶消化组织块法分离培养绵羊的乳腺上皮细胞,通过形态学观察、免疫荧光染色和RT-PCR等方法对细胞进行鉴定;用不同浓度的脂多糖（LPS）作用细胞后,通过CCK-8法检测细胞相对存活率;利用ELISA方法检测IL-8和TNF-α表达量;通过Western blot检测TLR-4蛋白表达量。结果显示,酶消化组织块法是最符合预期的方法,可在较短时间内获得活力旺盛的乳腺上皮细胞;细胞生长曲线呈"S"型,CK-18免疫荧光染色呈阳性,β-酪蛋白基因表达呈阳性。10 mg/L LPS处理12 h的细胞相对存活率明显升高（P<0.01）,细胞上清液中IL-8和TNF-α表达量极显著上升（P<0.01）,TLR-4蛋白表达量升高,表明细胞炎性模型建立成功。
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苏淮仔猪腹泻细菌性病原的分离鉴定与耐药性分析
《江苏农业科学 》 2021 北大核心
摘要：为了解淮安地区苏淮猪仔猪出现细菌性腹泻的病因并提供治疗方案,采集腹泻仔猪的肛拭子样品共95份,对采集的样品进行细菌分离与鉴定、动物致病性鉴定及耐药性分析.结果显示,本次试验共分离鉴定到78株大肠杆菌,92株沙门氏菌;动物致病性试验显示,大肠杆菌致小鼠死亡率为65.38%,沙门氏菌致小鼠死亡率为95.84%;药敏试验结果显示,大肠杆菌耐药率高于沙门氏菌,且均对青霉素类和林可霉素类高度耐药,对氟喹诺酮类耐药率最低.多重耐药结果显示,所有分离菌株均为多重耐药菌株,大肠杆菌主要表现8~10耐,沙门氏菌主要表现在6~8耐.
关键词： 仔猪;腹泻;大肠杆菌;沙门氏菌;耐药性
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Cry1B抗独特型单链抗体的定点突变及生物活性分析
《生物技术通报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：Bt毒素的长期应用使其在害虫抗药性等方面存在生态风险,这一现状促使高特异活性和新功能Bt抗虫资源的积极开发。前期研究发现抗独特型单链抗体制备技术是开发新型杀虫蛋白的一个新途径。然而获得的Bt Cry1B抗独特型单链抗体C7与昆虫BBMV结合能力不高,需进一步改造提高。通过分子模拟技术对C7与稻纵卷叶螟BBMV上的受体氨肽酶N进行同源建模、分子对接,并预测C7与氨肽酶N结合区域的热点残基。利用C7的热点残基构建饱和突变抗体库,并采用固相筛选方法,得到突变体Y124G。BIAcore分析表明Y124G与BBMV的结合能力增加,生物测定发现对稻纵卷叶螟的杀虫活性提高。这为抗体分子改造技术的应用奠定了基础,也为新型生物农药创制提供了新的思路。
关键词： Cry1B 分子改造 定点突变 杀虫活性 表面等离子共振
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甘蓝蔗糖磷酸合酶家族的鉴定和表达分析
《江苏农业科学 》 2021 北大核心
摘要：蔗糖磷酸合酶（SPS）是调节植物蔗糖生物合成的关键酶。SPS由不同的基因编码组成,具有不同的表达模式和功能差异。利用拟南芥SPS蛋白保守结构域在甘蓝全基因组共鉴定到6个甘蓝SPS家族成员。进化分析结果表明甘蓝SPS基因分为3个亚族。6个BoSPSs家族成员被定位在甘蓝的5条染色体上。启动子顺式作用元件分析结果表明,BoSPSs含有许多与激素、逆境和光响应相关的顺式作用元件。RNA-Seq结果表明,BoSPSA1a在各个组织中均具有较高的表达量,BoSPSB除了在芽中表达量较高,在其他各个器官/组织中表达量均较低;冷敏甘蓝（CS-D9）和耐冷甘蓝（CT-923）中BoSPSA1b低温处理后均上调表达,且不同时间点耐冷甘蓝中的表达量均明显高于冷敏甘蓝。本研究结果有助于了解甘蓝SPS家族的信息,增加了对这些基因在甘蓝生长发育过程中及低温胁迫中所起的作用的理解。
关键词： 蔗糖磷酸合酶 甘蓝 低温胁迫 BoSPSs基因 基因表达分析
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