科研产出
猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)福建分离株核衣壳蛋白基因(加的克隆与表达分析
《农业生物技术学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：猪传染性胃肠炎(swine transmissible gastroenteritis,TGE)是一种高度接触性肠道传染病,是我国法定检疫的疫病。为研究福建省猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)核衣壳蛋白基因(N)的分子特征及其原核表达产物的抗原性,参照GenBank中的TGEV全基因序列,设计合成一对扩增TGEV福建(FJ)分离株Ⅳ基因的特异性引物,进行克隆和序列分析,结果表明,TGEV-FJ株Ⅳ基因全长1149bp,编码382个氨基酸(GenBank登录号JQ700302),与国内外23株TGEVN基因的核苷酸同源性,氨基酸同源性进行比较分析,N基因核苷酸的同源性为95.4%~99.8%,氨基酸同源性为96.1%~100%。TGEV.FJ株Ⅳ基因克隆至原核表达载体pET-32a中,并转化到大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3)中进行表达。SDS—PAGE分析表明,重组蛋白约为68kD,与预期分子量一致;Westemblot分析表明,重组蛋白能与抗TGEV阳性血清反应出现特异性条带;以纯化的重组TGEVN蛋白为包被抗原建立的间接ELISA抗体检测方法具有良好的特异性,送检20份猪(Susscrofa)TGEV阳性血清样本中检出16份阳性结果、10份阴性血清样本中检出9份阴性结果。利用纯化的TGEV重组N蛋白免疫Balb/c小鼠,杂交瘤技术制备单克隆抗体,获得了1株特异性好并能稳定分泌抗TGEVN蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株(命名为1-27),间接免疫荧光试验证明,该单抗能特异性识别TGEV全病毒抗原。TGEVN蛋白的单克隆抗体制备为建立TGEV免疫学检测方法提供了基础资料。
关键词： 猪 传染性胃肠炎病毒（TGEV） TGEV-福建（Fujian）分离株 核衣壳蛋白 N基因 原核表达
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果胶酶基因在内生芽孢杆菌中的过表达及其对定殖的影响
《应用与环境生物学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：为探讨果胶酶基因与内生芽孢杆菌在植物体内定殖的相关性,PCR克隆了2株内生芽孢杆菌的果胶酶全长基因,并将全基因序列插入穿梭载体pGFP4412,构建了果胶酶基因过表达载体,转化内生细菌实现了果胶酶过表达.平板果胶酶酶活检测表明野生菌的水解圈直径仅为过表达突变体水解圈直径的50%.通过实时荧光定量PCR分析突变体和对照菌株(BS2-gfp和TB2-gfp)中果胶酶基因的表达情况,发现突变体的表达量分别是对照菌株表达量的82和85倍.统计了突变体与对照菌株28 d内在小白菜各组织中的定殖数量,结果表明:接种后1-3 d,突变体在根茎叶中的定殖数量与对照菌株比较,差异性显著(P<0.05).接种后7-28 d,除第7天(d 7)过表达菌株与对照菌株在根中的定殖菌量有显著性差异(P<0.05)外,其余统计结果均无显著性差异(P>0.05).在为期28 d的分离过程中,突变体的定殖数量经历了一个由显著高于对照菌株,到略高或逐渐与对照菌株的菌量趋于一致的过程.本研究初步证明了果胶酶基因在内生芽孢杆菌的定殖初期起到了一定的作用.
关键词： 内生芽孢杆菌 果胶酶基因 实时荧光定量PCR 过表达 定殖
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6种嘧菌酯复配剂对水稻纹枯病的防治效果
《中国农学通报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：为有效防治水稻纹枯病,延缓病原菌对嘧菌酯抗药性的产生,开展了6种嘧菌酯复配剂对水稻纹枯病的田间药效试验。试验结果表明,20%氟酰胺·嘧菌酯水分散粒剂、75%甲硫·嘧菌酯水分散粒剂、75%戊唑醇·嘧菌酯水分散粒剂和32%丙环唑·嘧菌酯悬浮剂4种复配剂对水稻纹枯病有良好的防治效果,其防效均高于生产上广泛应用的5%井岗霉素水剂,防治效果分别为82.50%～86.68%、73.87%～85.33%、73.20%～84.75%和73.71%～82.63%。
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龙眼体胚相关未知蛋白基因DlUP-5的克隆及其在龙眼体胚发生过程中的表达
《福建农林大学学报(自然科学版) 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：以龙眼体胚发生早期的胚性培养物为材料,通过简并引物结合PCR进行cDNA末端快速克隆(RACE)的技术,克隆到了龙眼体胚相关未知蛋白基因DlUP-5全长序列,其cDNA全长为887 bp,由681个核苷酸组成的开放阅读框,编码226个氨基酸(GenBank登陆号为GQ443759).该基因推导的蛋白分子质量为24511.9 u,理论等电点pI为9.65;该蛋白是Frigi-da-like蛋白质家族成员,是一个具有Frigida组件,无典型信号肽结构,无跨膜螺旋的亲水性蛋白;不规则卷曲是其最大量的结构元件,并且主要集中在C端区域.实时荧光定量PCR分析结果显示,该基因在龙眼体胚发生过程中均有表达,呈"N"形趋势,其中以不完全胚性紧实结构阶段最高,而鱼雷形胚阶段表达量最低;方差分析表明,鱼雷形胚阶段DlUP-5基因表达量与其他7个阶段存在极显著差异.该研究结果对DlUP-5基因在龙眼体胚发生过程中的作用有了一个初步的认识,其在龙眼胚性愈伤组织胚胎发生能力、早期体胚正常发育和体胚成熟过程等方面可能起重要作用.
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基于Android平台和3G技术的农业智能诊断系统设计
《广东农业科学 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：由于3G网络覆盖面广,可靠性高,无线传输数据量大,同时安卓系统是掌上操作系统的主流,因此我们设计了基于Android平台和3G技术的农业智能诊断系统,不受时间、空间的限制,向广大的种养植户提供技术咨询、病虫害诊断、疫病防控等。
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表达广谱抗真菌蛋白转基因水稻元素组成分析
《中国食品学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：应用环境扫描电子显微镜和能谱分析方法研究转广谱抗真菌基因碱性几丁质酶基因RC24、苜蓿葡聚糖酶基因β-1,3-Glu、酸性几丁质酶基因RAC22对不同生长期非转基因水稻(七丝软占)和转抗真菌水稻(双价抗真菌转基因水稻转品8、三价抗真菌转基因水稻转品1)抗病元素化学元素组成差异。分析结果表明:除C、H、O外,水稻叶、叶鞘主要含有Si、K、Na、Cl、Mg5种与抗病相关的化学元素,其中Si的相对含量为10%～15%,K、Na相对含量为0.2%～3.6%,Mg、Cl相对含量较低,大部分样品小于1%。外源基因的转入对水稻叶、叶鞘化学元素相对含量有一定影响,其中Si、K、Na的相对含量变化明显,差异最明显的分别达50.8%,115.3%,251.9%。存在时空变化,其机理尚待研究。
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三株鸭源H9N2亚型禽流感病毒福建株全基因的测序及遗传进化分析
《中国兽医科学 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：为明确3株鸭源H9N2亚型禽流感病毒福建株A/Muscovy duck/Fujian/CL/1997(H9N2)(简称CL株)、A/duck/Fujian/MH/2003(H9N2)(简称MH株)和A/duck/Fujian/FQ2/2007(H9N2)(简称FQ2株)全基因组的分子特征和遗传进化情况,采用RT-PCR方法扩增这3株病毒全基因片段,并进行序列比较及遗传进化分析。结果表明,所克隆的8个基因片段均有完整的开放阅读框,其血凝素基因蛋白裂解位点的氨基酸组成为-RSSR*GLF-,为不连续的碱性氨基酸,其静脉接种指数远小于1.2,均符合低致病性AIVHA蛋白裂解位点特征;CL株和MH株的HA基因在遗传进化上属于常见的CK/BJ/1/94群系;FQ2株HA基因在遗传进化上属于DK/HK/Y280/97群系,3株H9N2亚型AIV HA基因在遗传进化上均属于经典的欧亚种系。3株H9N2亚型AIV NA基因颈部均存在缺失,CL株和MH株的NA基因在遗传进化上属于常见的CK/BJ/1/94群系,FQ2株NA基因在遗传进化上属于G1群系。CL株和MH株的其他6个基因在遗传进化上均和经典的CK/BJ/1/94一致,而FQ2株则可能是由不同流感病毒基因亚系间发生自然重排的产物。
关键词： 鸭源H9N2亚型禽流感病毒 全基因 序列分析 遗传进化
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紫云英ISSR引物的筛选及PCR反应体系的优化
《植物遗传资源学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：以紫云英为研究材料,用哥伦比亚大学(UBC)公布的100条ISSR引物和11种株系紫云英品种的DNA为模板进行PCR扩增,筛选出33条扩增条带较好的ISSR引物,对其中的ISSR引物进行梯度PCR,筛选出最佳的退火温度。再采用正交试验和单因素试验相结合的方法对紫云英ISSR-PCR反应体系的5种因素(模板、Mg2+、TaqDNA聚合酶、dNTP及引物)进行优化浓度。确立了适合紫云英的ISSR分析的反应体系。在25μl反应体系中,其反应浓度为:DNA模版50.00ng,Mg2+2.00mol/L,Taq聚合酶1.0 U,dNTP 0.25mmol/L,引物0.20μmol/L,2.5μl 10×buffer。本试验为以后利用ISSR技术进行紫云英遗传多样性分析和物种保护奠定了技术基础。
关键词： 紫云英 退火温度 ISSR引物 正交试验 体系优化
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龙眼体细胞胚发生早期的蛋白质组学
《中国农业科学 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：【目的】通过龙眼(Dimocarpus longan Lour.)体细胞胚发生早期5个阶段的蛋白质组学研究,为植物胚胎发育相关蛋白基因分离和植物体细胞胚发生相关机制等的深入研究奠定基础。【方法】利用已建立的龙眼体细胞胚发生再生系统,经同步化培养获得龙眼体细胞胚发生早期5个阶段胚性培养物,并采用双向电泳和质谱技术对龙眼体细胞胚发生早期的蛋白质组变化进行分析。【结果】龙眼体细胞胚发生早期5个阶段的蛋白质2D表达谱可检测到1 203—1 798个蛋白点,其在龙眼体细胞胚发生早期各阶段大部分具有阶段差异表达特性,有小部分是阶段特异表达,根据其蛋白数目、表达丰度、分子量和等电点等变化,确定了龙眼体细胞胚发生早期的ECII到CpECGE阶段是体细胞胚发生早期的关键性阶段。成功鉴定45个差异蛋白,成功率为37%,其中以能量、碳水化合物代谢相关蛋白和氧化胁迫反应相关蛋白占多数,分别为22%和27%;通过其功能分析可以推断出,龙眼体细胞胚发生早期,能量和糖代谢是体细胞胚发生的基础,而氧化胁迫反应是体细胞胚发生的先决条件,并通过参与细胞骨架的稳定、氮代谢、信号转导、基因调控、蛋白质的翻译加工修饰和定位等功能的蛋白,构成一个庞大的龙眼体细胞胚发生蛋白质调控网络系统,保证体细胞胚的正常发育。【结论】对龙眼体细胞胚发生早期过程的蛋白质表达变化有了较全面的了解,蛋白质表达数量呈先减低后升高再减低的趋势,龙眼体细胞胚发生早期能量和糖代谢旺盛,氧化胁迫反应相关蛋白对体细胞胚早期的发生和发育有重要的调控作用。
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