科研产出
缺失免疫抑制位点的人早孕因子重组蛋白的免疫原性
《细胞与分子免疫学杂志 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：目的:构建缺失免疫抑制位点的人早孕因子基因的原核表达载体pGEX6P-EPF11,诱导GST-EPF11融合蛋白在大肠杆菌中表达,并免疫小鼠,测定效价。方法:以pMD18T-HSPE1模板,PCR扩增缺失免疫抑制位点的人早孕因子基因片段,经限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切后,连接到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达质粒pGEX6P-EPF11。将表达质粒转化大肠杆菌BL21,以1 mmol/L IPTG进行诱导表达GST-EPF11融合蛋白,Western blot鉴定。以表达的GST-EPF11融合蛋白作为免疫原免疫小鼠,抗体效价用ELISA检测。结果:在大肠杆菌中成功表达出相对分子质量约35 000的融合蛋白GST-EPF11。ELISA法检测免疫小鼠的抗体血清可达1∶12 800。结论:在大肠杆菌中成功表达出GST-EPF11融合蛋白,并免疫了小鼠,测定了抗体效价,为下步制备缺失免疫抑制位点的人早孕因子的单克隆抗体(mAb)奠定了基础。
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猪FcγRⅢ和γ链共转染Marc-145细胞系的建立
《华北农学报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：为了建立稳定表达猪FcγRⅢ(Porcine Fc gamma receptorⅢ,poFcγRⅢ)的Marc-145细胞系,从PAM细胞中提取总RNA,应用RT-PCR技术获得猪FcγRⅢ和γ链的cDNA,并构建PIREShyg3-γ和pcDNA3.1-FcγRⅢ真核表达质粒;用脂质体共转染Marc-145细胞,经潮霉素B(300 mg/L)和G418(400 mg/L)共筛选获得稳定表达猪FcγRⅢ的细胞系;运用RT-PCR、玫瑰花环试验和流式细胞术对细胞系进行了鉴定。结果表明,成功构建了猪FcγRⅢ和γ链真核表达载体,建立了稳定表达猪FcγRⅢ的细胞系,表达于转染细胞表面的猪FcγRⅢ受体分子能与猪IgG特异结合。
关键词： 猪FcγRⅢ受体 γ链 共转染 Marc145细胞
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不同秋眠型紫花苜蓿对北京地区自然光周期的生长反应
《中国草地学报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：通过对4个秋眠型不同标准秋眠级美国苜蓿品种生长高度的测定,研究了北京地区苜蓿春季第一茬草和秋季再生草的生长性状与自然光照时间的关系。结果表明:4个秋眠型品种均存在明显的自然光周期规律,春季长日照条件下生长发育迅速,秋季短日照下再生趋缓,并呈不同程度的休眠。春季第一茬草盛花期前,各秋眠型品种生长速度逐步加快,增长趋势相同,株高与日照长度呈极显著正相关,各秋眠型间株高和生长速度的差异均不显著。在秋季日照缩短过程中,不同秋眠型品种再生株高与日照长度极显著负相关,4个秋眠型品种的再生株高差异极显著(P<0.01);再生株高顺序为极非秋眠型(UC-1465)>非秋眠型(Pierce)>半秋眠型(Archer)>秋眠型(Maver-ick);其再生速度曲线与春季的曲线不同。
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夜间收集小型趋光性昆虫的新方法
《河南农业科学 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：传统的灯诱方法在夜间收集小型昆虫比较麻烦,尤其是体软的蜉蝣目、脉翅目、双翅目昆虫,电击死亡后堆积在一起很难分开,严重影响标本的质量。为此,介绍一种方便收集小型趋光性昆虫的方法。即用3根原木撑起白布,白布前挂一排黄板,开灯前黄板刷上机油,开灯后趋光性小型昆虫飞落在黄板上,机油的黏性使其紧紧粘在黄板上无法挣脱,挣扎幅度很小,虫体不受损。大型昆虫一般不落到黄板上,黄板表面基本干净无污染,小型昆虫均匀粘在黄板上,完整性好,方便收集者观察取样。收集时用毛笔轻轻扫下目标昆虫,保存在75%乙醇中即可。黄板上重新刷上机油可重复使用。该方法操作简单,使用的材料均无毒性,对人安全,对环境无污染。
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甘薯脉花叶病毒外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达及其抗血清的制备
《植物病理学报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：根据已报道的甘薯脉花叶病毒(Sweet potato vein mosaic virus,SPVMV)外壳蛋白(CP)基因的核苷酸序列合成引物,利用RT-PCR方法克隆了SPVMV河南分离物(SPVMV-HN)基因组3′端1.8 kb的基因片段,包括部分NIb基因序列和完整的CP基因及3′端非编码区序列(3′UTR)。序列分析表明,SPVMV-HN的CP基因由996个核苷酸组成(GenBank登录号为FJ687211),编码332个氨基酸残基。与已发表的SPVMV其他分离物相比,其推导的氨基酸序列一致性为95.2%~98.5%,与SPVMV广东分离物的氨基酸序列一致性为97.9%。将CP基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,SDS-PAGE分析表明,经IPTG诱导,CP基因在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中得到了高效表达。以表达的蛋白为抗原,免疫家兔,制备了SPVMV外壳蛋白的特异性抗血清。ACP-ELISA检测结果表明,制备的抗血清可用于田间甘薯样品的检测。利用SPVMV的抗血清,对采自全国14个省(市)的田间甘薯样品以及嫁接的巴西牵牛样品进行了检测,结果表明,SPVMV在我国甘薯上普遍存在。
关键词： 甘薯脉花叶病毒 外壳蛋白基因 序列分析 原核表达 抗血清
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我国玉米全程机械化育种目标浅析
《河南农业科学 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：玉米全程机械化是提高我国玉米综合生产能力、保证农民增收的重要保障。与美国相比,我国目前还没有适合全程机械化操作的玉米品种,为了尽快实现这一目标,必须从根本上改变传统的育种目标。从全程机械化包括播种、田间管理、收获、去雄等角度看,未来的玉米育种目标应要求母本种子角质化程度高、籽粒偏圆形,抗倒、抗病、抗虫能力强,穗位适中、整齐一致,苞叶长短适中、后期松开,中早熟,籽粒灌浆快、后期脱水快。
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抗赭曲霉毒素A单克隆抗体的制备及免疫学鉴定
《食品科学 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：通过碳化二亚胺法(EDC法)制备免疫原OTA-BSA,并免疫小鼠,经杂交瘤技术建立产抗赭曲霉毒素A(OTA)单克隆抗体的杂交瘤细胞株1株。通过体内诱生腹水法制备腹水,纯化后对其亚型、效价、灵敏性、亲和性、特异性等免疫学特性进行鉴定;单抗亚类为IgG1型,间接ELISA效价1:6.4×105,IC50为112.8pg/mL,亲和常数为9.74×1011L/mol,与赭曲霉毒素B交叉反应率为5.6%,与其他常见真菌产物交叉小于0.003%;本实验制备的抗OTA单克隆抗体具有高效、敏感、特异等特点,适合OTA的免疫学快速检测。
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河南省玉米地方品种主要产量性状间的相关和通径分析
《中国农学通报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：为了更有效的改良和利用现有的玉米地方品种,基于表型和基因型的聚类分析的基础上,从不同类群中筛选到46份河南省优异地方品种,进行产量及其相关性状的重复鉴定。相关和通径分析结果表明,对产量影响最大的是千粒重(r=0.7734),其次为穗长和穗粗,均达极显著正相关,其中千粒重具有最大的正向直接通径系数(P=0.6518),而穗行数对产量影响较小,未达显著水平。因此,提高千粒重,同时兼顾其他产量性状是提高河南地方品种产量的有效途径。结合田间株型等性状,从众多的地方品种中培育产量突出的自交系,为玉米育种积累材料,并为今后的相关研究提供参考。
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