科研产出
内生芽孢杆菌BS2的β-1,4-内切葡聚糖酶基因与定殖相关性
《中国农业科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】克隆植物内生解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)BS2的β-1,4-内切葡聚糖酶基因(β-1,4-endoglucanase gene,eglS),探明BS2中该基因与定殖的相关性。【方法】以枯草芽孢杆菌BS168基因组为模板扩增组成型启动子rpsD。依据芽孢杆菌β-1,4-内切葡聚糖酶基因的同源序列设计1对引物,以BS2基因组为模板扩增eglS。将rpsD启动子基因和eglS片段用T4连接酶连接,并对连接产物进行PCR扩增,得到eglS表达盒片段。将表达盒片段插入穿梭载体pGFP4412用以构建eglS过表达质粒。设计引物扩增eglS的同源重组片段,与具有单交换功能的整合载体pMUTIN-GFP+连接构建敲除质粒。eglS的过表达质粒和敲除质粒转化芽孢杆菌感受态细胞分别获得过表达突变体和敲除突变体。将过表达质粒转化敲除突变体感受态细胞获得互补突变体。采用荧光显微镜观察、PCR、平板酶活力检测及实时荧光定量PCR方法鉴定突变体。3,5-二硝基水杨酸比色法(DNS法)测定突变体和野生菌的β-1,4-内切葡聚糖酶活力,同时采用定量灌根接种法检测不同菌株30 d内在小白菜各组织中的定殖数量。【结果】获得在荧光显微镜下呈现绿色荧光的过表达突变体和互补突变体。PCR检测结果表明敲除突变体中能够扩增出675 bp的目的条带,而以野生菌株和整合载体DNA为模板扩增时没有对应条带,成功得到敲除突变体。野生菌及各突变体β-1,4-内切葡聚糖酶平板活力检测结果显示,野生菌BS2只有一个水解圈且透明,过表达突变体与互补突变体有大于野生菌的双水解圈,内圈的水解圈透明,外圈的水解圈不透明。敲除突变体沿菌体边缘也有一个小水解圈。实时荧光定量PCR的分析结果证实野生菌及突变体间β-1,4-内切葡聚糖酶基因的表达量存在差异,过表达突变体和互补突变体中β-1,4-内切葡聚糖酶基因的表达量增高,分别是野生菌的111和82倍;敲除突变体中β-1,4-内切葡聚糖酶基因的表达量相对于野生菌BS2几乎为0。突变体与野生菌在小白菜体内定殖数量以及酶活力检测结果表明,在相同的小白菜组织以及相同的分离时间内,敲除突变体的定殖数量最少,其在根茎叶中的定殖数量与其他菌株相比均有显著性差异(P<0.05)。敲除突变体的酶活力也显著低于其他菌株(P<0.05)。过表达突变体的酶活力以及在小白菜体内的定殖数量在P<0.05水平上显著高于敲除突变体和野生菌,互补突变体的酶活力和在小白菜体内的定殖数量与过表达突变体基本一致。【结论】内生芽孢杆菌BS2菌株β-1,4-内切葡聚糖酶的活力高低与其在小白菜体内的定殖数量之间呈正相关关系,其表达的β-1,4-内切葡聚糖酶在定殖过程中发挥一定作用。
关键词： 内生芽孢杆菌BS2 β-1,4-内切葡聚糖酶 过表达 基因敲除 定殖
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苦瓜新品种闽研3号的选育
《中国蔬菜 》 2014 北大核心
摘要：闽研3号是以k-48为母本,以k-43为父本选育而成的苦瓜一代杂种。坐果能力强,瓜呈长纺锤状,瓜皮绿色有光泽,瓜长28~37 cm,横径6~7 cm,肉厚0.8~1.1 cm,平均单瓜质量500 g。肉质甘脆微苦,品质好。每667 m2产量2 500~3 000 kg,适合福建省及周边地区种植。
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双酶分步酶解制备玉米多肽
《福建农林大学学报(自然科学版) 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：在Alcalase酶水解玉米蛋白粉研究的基础上,以多肽得率为指标,从5种不同蛋白酶中筛选出Protex.7L酶作为最适水解酶继续酶解玉米蛋白Alcalase酶水解物.采用响应面分析法确定Protex.7L酶继续酶解制备玉米多肽的最佳工艺参数为加酶量1090 U·g-1,p H 7.6,反应温度42.0℃时,继续酶解60 min.在此条件下,体系最终的多肽得率可达(56.28±0.18)%,与理论预测值的相对误差为±1%,比单独应用Alcalase酶提高21.05%.
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鸭疫里默氏杆菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立
《中国预防兽医学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为建立鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestife,RA)定量检测方法,本研究根据RA的铁依赖抑制子基因(RaDtxR)序列,设计特异性引物和探针,建立基于TaqMan探针检测RA的荧光定量PCR方法。该方法检测RA RaDtxR在4.27×102拷贝/μL~4.27×106拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,其扩增相关系数为0.998,扩增效率为99%,最低检测下限为4.27×102拷贝/μL。对常见RA血清型(1型、2型、3型和10型)检测结果均为阳性;而对大肠杆菌、巴氏杆菌、沙门氏菌、Ⅰ型鸭肝炎病毒、禽坦布苏病毒和鸭圆环病毒等常见鸭群病原检测均为阴性。该方法重复性好,组内和组间变异系数分别为0.23%~0.77%和0.93%~1.32%。该方法的建立为RA感染宿主靶器官的感染程度和定量分析奠定基础。
小菜蛾中肠氨肽酶基因PxAPN5的克隆、原核表达及蛋白质同源建模分析
《昆虫学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】克隆和表达小菜蛾Plutella xylostella氨肽酶基因,并进行基因序列分析和同源建模分析。【方法】以小菜蛾中肠c DNA为模板克隆分析氨肽酶基因序列,原核表达氨肽酶蛋白并进行酶活性测定,应用配体印迹分析氨肽酶与Cry2Ab蛋白的结合,通过蛋白质建模对突变位点进行分析。【结果】从小菜蛾中肠c DNA扩增出氨肽酶基因,该基因全长2 853 bp,编码950个氨基酸,预测蛋白分子量为107.3871 k Da,等电点为5.24;进化树分析显示,克隆得到的氨肽酶基因属于APN家族5,将其命名为Px APN5(Gen Bank登录号:KM034756)。Px APN5蛋白具有鳞翅目昆虫氨肽酶蛋白的保守性特征,即含有N-糖基化位点、O-糖基化位点和GPI锚定位点,具有"HEXXH"锌蛋白酶结构域和C端跨膜区域。在大肠杆菌Escherichia coli中原核表达Px APN5,表达产物经SDS-PAGE电泳,在110 k Da附近出现特异性条带;酶活性测试显示菌体破碎上清液具有氨肽酶活性,比活力为1 047.2 U/g。配体印迹结果显示表达的Px APN5能与Cry2Ab蛋白特异性结合。多序列比对结果表明,与其他已报道的小菜蛾氨肽酶相比,Px APN5氨基酸序列有3个保守性位点发生了突变,并通过蛋白质建模的方式表征突变位点。【结论】本研究成功克隆和表达了具有氨肽酶活性的小菜蛾氨肽酶,并发现其能与Cry2Ab蛋白特异性结合;通过蛋白质建模对氨肽酶突变位点的特征及功能进行了预测。这些结果对小菜蛾氨肽酶的功能性研究提供了理论基础。
关键词： 小菜蛾 氨肽酶基因 基因分析 原核表达 酶活性 配体印迹 同源建模
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不同浓度氟对茶树幼苗叶片叶绿素荧光特性的影响
《热带亚热带植物学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为探讨氟对茶树[Camellia sinensis(L.)O.Kuntze]叶片叶绿素荧光特性的影响,采用盆栽沙培法,用不同浓度的Na F溶液处理6周,对茶树叶片的叶绿素荧光特性进行研究。结果表明,用600 mg L–1的氟处理,茶苗叶片的OJIP曲线O相呈小幅度上升,P相下降得非常明显,IP相显著下降,出现清晰的L点(150μs)和K点(300μs);经过氟处理的茶苗叶片I点、J点的相对可变荧光和耗散能增加;荧光参数RC/CSo、ETo/ABS、PIabs、PIcs等明显下降,而DIo/RC、DIo/CSo和DIo/ABS等参数大幅度增加;叶片氟含量与ETo/TRo、REo/ABS、PICS呈负相关,与DIo/RC呈正相关。因此,氟胁迫处理削弱了茶树叶片的光合电子传递能力,影响了光合机构的作用,同时叶片以增加自身热耗散来防止受到光抑制和光破坏。
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“祥龙”火龙果引种表现及关键栽培技术
《中国南方果树 》 2014 北大核心
摘要：火龙果Hylocereus undatus Britt.et Rose是仙人掌科,量天尺属多年生攀缘性热带亚热带肉质植物,台湾20世纪90年代从国外引种驯化改良。近年来,广东、广西等省(区)先后从台湾引进"祥龙"火龙果种植,2007年福建省农业科学院果树研究所从广东引进该品种。经栽培观察,"祥龙"火龙果表现出适应性强、果大、质优、速生、早结、丰产、经济效益高、无大小年等优点。扦插苗4月定植后第2年开
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福州菜地土壤中有机磷农药残留特征及风险评价
《农业环境科学学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：采用气相色谱-火焰光度检测器(GC-FPD),测定福州菜地土壤样品中OPs的残留量,同时采用SES推导公式推算其土壤中的环境标准值与实测值进行比较,从而评价土壤中OPs残留量对蔬菜的种植风险。研究结果表明,22种OPs中,未检出的有14种,占检测OPs种类的63.64%,不同县(市、区)菜地土壤样点中检出OPs的品种数及其检出率和残留量差异较大,辛硫磷、对硫磷和毒死蜱检出率较高,分别为30.23%、23.26%和11.63%,平均残留量为0.816、0.090、0.181 mg·kg-1,是福州菜地土壤主要污染物。研究还表明,OPs的残留量对不同蔬菜种植风险程度不同,但菜地土壤中OPs污染总体水平和风险水平均较低。
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