科研产出
湖羊GnRH受体基因的单核苷酸多态性研究
《江西农业学报 》 2009
摘要：对高繁殖力绵羊品种(湖羊)和低繁殖力绵羊品种(陶赛特、特克赛尔和哈萨克)促性腺激素释放激素受体(GnRH-R)基因的5′非翻译区、外显子1和外显子2部分序列进行了PCR-SSCP分析,结果发现在5′非翻译区发生3处碱基突变(552T→G、653C→G、654G→A);在第二外显子区发生1处碱基突变(230G→C),该突变导致了第66位氨基酸的改变(精氨酸→丝氨酸)。并对这4个位点在4个绵羊品种间的基因频率进行了初步分析:对于引物1,4个绵羊群体均检测到AA基因型,AB基因型只出现在湖羊、陶赛特羊和特克塞尔羊中,仅在哈萨克羊中检测到CC基因型。对于引物2,4个绵羊群体均检测到DD基因型;DE基因型只出现在湖羊和哈萨克羊中;仅在湖羊中检测到EE基因型。
关键词： 促性腺激素释放激素受体(GnRH-R)基因 5′非翻译区 单核苷酸多态性 PCR-SSCP
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中国西北地区油菜茎象甲的消长与防治策略
《中国油料作物学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：油菜茎象甲(Ceuthorhynchus asperRoel)是中国西北地区油菜的主要害虫,一年发生一代,以成虫越冬。发生规律因地区、生态条件或当地小气候不同而差异较大,不同油菜种植区及其所处地理海拔不同,其消长规律也不相同;同一地区阳坡地带发生较早,其次是平川和阴坡地。在冬油菜区,油菜茎象甲成虫于2月至3月上中旬陆续出土活动,2月中旬至3月下旬产卵为害,其成虫均有越夏越冬习性。在春油菜区,油菜茎象甲成虫于4月下旬至5月上中旬出土活动,5月中下旬交尾产卵,其蛹羽化为成虫后因气候冷凉大多不经过越夏,而是活动一段时期后直接越冬。对茎象甲的防治应掌握其活动消长规律,抓好关键时期采用化学和农业防治措施综合控制。
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绵羊角蛋白中间丝I型基因多态性及其与羊毛性状的关系
《江苏农业科学 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：采用PCR-RFLP分子标记技术,检测了湖羊、哈萨克羊及中国美利奴多胎羊、"A"型羊和细型、超细型羊5个群体,共314只个体,角蛋白中间丝I型基因第1外显子的遗传多态性,并进行与绵羊羊毛性状相关性分析。结果表明:480 bp PCR产物经M spⅠ消化分析后在5个绵羊群体中均有2个等位基因突变(M占0.910 8,N占0.089 2)和3种基因型(MM占0.839 2,MN占0.141 5,NN占0.019 3),优势等位基因M基因频率比欧洲绵羊和印度绵羊品种高。序列比对发现,第1个M spⅠ酶切位点发生1个碱基C→T突变(g.160 C>T)。中国美利奴羊在该位点处于Hardy-W e inberg不平衡状态(P<0.05),其中中国美利奴细型、超细型群体在该位点处于Hardy-W e inberg极不平衡状态(P<0.01)。该位点与羊毛纤维直径不相关。
关键词： 中国美利奴 角蛋白中间丝I型基因 羊毛性状 多态性 羊毛弹力
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临床等级质粒DNA的实验室制备
《生物技术通报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：在实验室有效获得100 mg临床试验等级的质粒DNA。摇床发酵3个批次,每批次4 L培养液,产生大约160 g的细菌沉淀物。碱裂解菌体,气浮法结合离心分离浮杂沉淀。裂解液经0.45/0.22μm囊式过滤器过滤。然后采用阴离子色谱介质富集质粒,异丙醇沉淀。重新溶解沉淀后采用100 kD切向流超滤处理,获得100 mg临床试验等级质粒DNA。体外、体内转染试验对质粒表达效果进行了鉴定。结果表明,纯化的质粒DNA几乎检测不到内毒素、RNA和蛋白质,A260/A280比值在1.82～1.86范围内。纯化的质粒DNA能够满足动物临床试验。
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牛病毒性腹泻病毒玛纳斯株E2基因的克隆及其主要抗原表位区的分段表达
《中国兽医科学 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：应用RT-PCR方法扩增了牛病毒性腹泻病毒(BVDV)新疆玛纳斯分离株的E2基因,应用软件对序列进行分析,预测了可能存在的抗原表位;分别扩增了包含预测抗原位点的片段(1～118)-(144～340)-(100～300)-(1～345),并将其克隆到pMD18-T Si mple载体中;将重组质粒pMD-(1～118)、pMD-(144～340)、pMD-(100～300)、pMD-(1～345)的HindⅢ+BamHI双酶切产物分别插入pET28a(+),构建了原核表达载体pET-(1～118)、pET-(144～340)、pET-(100～300)、pET-(1～345)。将这些原核表达载体分别导入BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE分析,结果显示,4个重组质粒在BL21(DE3)中均成功表达,表达融合蛋白的分子质量分别为18.6、28.2、29.2和43.9 ku,与预测蛋白质分子质量一致,Western-blot分析结果表明,28.2、29.2和43.9 ku的融合蛋白可被牛抗BVDV阳性血清识别。
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抗CP型、NCP型牛病毒性腹泻病毒高免卵黄抗体的制备
《中国畜牧兽医 》 2009 北大核心
摘要：本研究采用致细胞病变(cytopathic,CP)型牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)标准毒和非致细胞病变(noncytopathic,NCP)型新疆优势毒株免疫产蛋鸡,用改良PEG法提取卵黄抗体(IgY),并对提取的IgY采用SDS-PAGE检测纯度,间接ELISA检测免疫后每隔7 d的抗体效价,并测定所得抗体对NCP型BVDV的中和效价。结果表明,用该法提取的IgY纯度较高;间接ELISA结果证明,经过4次免疫后,抗CP型BVDV的效价达到1∶32000,抗NCP型BVDV的效价达到1∶40000,3个月后再次检测,卵黄抗体效价未见明显下降。最后一次免疫14 d的抗体对NCP型BVDV的中和效价达到1×10-3。
关键词： 牛病毒性腹泻病毒 卵黄抗体 间接ELISA 非致细胞病变
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绵羊附红细胞体感染PCR检测方法的建立
《石河子大学学报(自然科学版) 》 2009
摘要：为建立特异、敏感、快速的绵羊附红细胞体感染诊断方法,本试验根据已测得的绵羊附红细胞体16S rRNA基因序列(Gene Bank:EU916726、FJ440328),设计1对特异性引物,建立了绵羊附红细胞体的PCR诊断方法。特异性实验和敏感性实验结果表明,该方法与绵羊肺炎支原体、大肠杆菌、葡萄球菌、白色念珠菌、枯草杆菌均无交叉反应,能检测到绵羊附红细胞体最低DNA量为5.2pg/μL,在-80℃存放1年的血样中也检测到阳性样品。通过临床血样检测,证明该方法可以用于本病的早期感染和隐性感染的检测。
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用SMART技术构建扩展莫尼茨绦虫成虫全长cDNA文库
《中国畜牧兽医 》 2009 北大核心
摘要：利用SMART(switching mechanismat 5′end of RNA transcript)技术,采用Clontech公司的SMARTTMcDNALi-brary Construction Kit构建扩展莫尼茨绦虫成虫全长cDNA文库。用Trizol Reagent提取总RNA,用Oligotex mRNA Kits分离mRNA,以逆转录酶PowerScriptTM合成第一链cDNA,通过LD-PCR合成并扩增双链cDNA;扩增产物经蛋白酶K消化、SfiⅠ酶切、过SPIN-400TM柱去除小片段,连接到SfiⅠ消化过的pBluescriptⅡSK*质粒载体中,最后将重组质粒转化到E.coliDH5α内得到原始文库,扩增后,将文库保存于96孔细胞培养板中。经测定,构建的cDNA文库滴度为2.52×105PFU/mL;重组率为94.7%,插入片段长度多在0.5～3kb之间,平均长度约1.2kb。经5′端测序获得2642条有效序列,归并为1081条unigene。结果表明成功构建了扩展莫尼茨绦虫成虫全长cDNA文库,获得了较丰富的扩展莫尼茨绦虫成虫表达基因,为筛选扩展莫尼茨绦虫的功能基因全长序列奠定了基础。
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