科研产出
尼罗罗非鱼TIRAP基因克隆、组织表达及其在无乳链球菌、脂多糖和聚肌胞苷酸刺激下的免疫应答
《大连海洋大学学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：为研究包含TIR结构域的接头蛋白(TIR domain-containing adaptor protein,TIRAP)基因在TLR信号介导的先天免疫中的调控作用,通过反转录-聚合酶链式反应和分段扩增获得了尼罗罗非鱼Oreochromis niloticusTIRAP基因的cDNA全长,并对其生物信息学进行分析,利用RT-qPCR法分析TIRAP在健康鱼各组织中的表达情况,以及在无乳链球菌Streptococcus agalactiae、脂多糖(LPS)和聚肌胞苷酸(Poly I:C)刺激后不同组织不同时间点的表达量变化.结果表明:TIRAP cDNA全长2 900 bp,开放阅读框为816 bp,可编码291个氨基酸;系统进化分析显示,尼罗罗非鱼与快乐东方鲷Astatotilapia calliptera TIRAP的亲缘关系较近;TIRAP在尼罗罗非鱼11个组织(肝、皮肤、心脏、肾、胃、鳃、脑、脾、肠、血液和肌肉)中均有表达,其中肌肉中表达量最高(P<0.05),胃中表达量相对较低;人工感染无乳链球菌引起TIRAP基因在肠和肾中上调表达,均在注射后1 d时表达量达到最大值;LPS和Poly I:C刺激引起TIRAP基因在肝、脾和肾中上调表达,但在肠中表达量均低于对照组(0 h).研究表明,无乳链球菌、LPS和Poly I:C均能诱导TIRAP基因表达,TIRAP基因参与了尼罗罗非鱼免疫应答反应,暗示TIRAP在先天免疫中发挥作用.
关键词： 尼罗罗非鱼 包含TIR结构域的接头蛋白(TIRAP) 克隆 mRNA表达分析
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牡蛎疱疹病毒囊膜蛋白(ORF111)的基因克隆及表达
《渔业科学进展 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：本研究对编码牡蛎疱疹病毒(Ostreid herpesvirus 1,OsHV-1)囊膜蛋白的orf111基因进行了生物信息学分析、克隆和表达。首先,通过特异性PCR扩增得到orf111基因全长序列,并对其编码囊膜蛋白的理化性质、高级结构、跨膜区和抗原决定簇等进行生物信息学分析。结果显示,orf111编码一种稳定的疏水性蛋白,具有5个跨膜结构域和9个抗原决定簇,同时,氨基酸序列中还包含1个高度保守的精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp, RGD)结构域。随后,构建了pET28a-orf111重组质粒,并将其转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞中。最后,通过使用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,表达产物分子量约为32 kDa。本研究应用原核表达得到了含RGD结构域的OsHV-1囊膜蛋白,为进一步制备ORF111蛋白单克隆抗体及开展牡蛎疱疹病毒侵染机制的研究奠定了重要基础,为将来OsHV-1的防控工作提供新的思路。
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黄条鰤(Seriola aureovittata)MyHC基因克隆及其在早期发育阶段表达研究
《海洋与湖沼 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：为解析肌球蛋白重链(MyHC)基因在黄条鰤(Seriola aureovittata)生长发育过程中作用机制,本研究采用RACE技术,克隆了黄条鰤MyHC基因全长cDNA序列,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)方法对MyHC在黄条鰤不同组织、胚胎发育过程以及仔稚幼鱼发育过程中的表达特征进行了研究。结果表明:黄条鰤MyHC基因全长为6143bp,开放阅读框为5811bp,编码了1936个氨基酸,由3个保守结构域组成即MYSc-classⅡ、Myosin taill和SH3;系统进化树分析显示黄条鰤MyHC与高体鰤进化关系最近。qRT-PCR分析发现黄条鰤MyHC在各组织中均有表达,但在肌肉中表达量最高(P<0.05);随着黄条鰤胚胎发育的进行,MyHC在16细胞期之前表达量较高,在胚体下包2/3时期表达量显著升高,且在孵化期达到峰值(P<0.05:);在仔稚幼鱼发育阶段,MyHC在孵化后20d后表达量显著升高,30d表达水平达到峰值(P<0.05),随后的35d到40d表达水平略有下降但仍保持较高表达趋势,黄条鰤MyHC表达具有发育阶段表达的特异性。MyHC表达特征揭示其参与了调控黄条鰤的早期生长发育。
关键词： 黄条鰤 MyHC 胚胎发育 仔稚幼鱼发育 基因克隆 表达分析
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牙鲆efhd2和tbc1d25基因的克隆和表达分析
《渔业科学进展 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：为在分子水平解析牙鲆(Paralichthys olivaceus)抗淋巴囊肿病的机理,本研究克隆牙鲆淋巴囊肿抗病免疫相关基因efhd2和tbc1d25的c DNA全序列,运用生物信息学方法对基因序列进行了详细分析;同时,采用荧光定量PCR分析了efhd2和tbc1d25基因在牙鲆胚胎发育不同阶段、淋巴囊肿抗病和患病个体不同组织的表达特征.结果显示,efhd2基因c DNA全长为5231 bp,开放阅读框(ORF)长为699 bp,编码232个氨基酸.tbc1d25基因c DNA全长为3173 bp,ORF长为2601 bp,编码866个氨基酸.定量结果显示,efhd2和tbc1d25基因在胚胎发育的各个时期均有不同程度的表达,其中,efhd2在出膜仔鱼期表达量最高,而tbc1d25在受精卵中的表达量显著高于其他时期(P<0.05).在所研究的淋巴囊肿抗病和患病个体不同组织中,efhd2和tbc1d25基因均有不同程度的表达,抗病个体的血液中,这2个基因的表达量均显著高于患病个体(P<0.05).本研究结果为深入探讨efhd2和tbc1d25基因功能和解析牙鲆淋巴囊肿抗病机理提供了基础资料.
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星点东方纯胚胎发育的观察
《海洋渔业 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：为探讨星点东方纯(Takifgu niphobles)作为海水鱼遗传生物学和鱼类行为学研究实验动物的可行性提供科学依据,选取北戴河海域自然成熟的星点东方纯亲鱼,经人工催产授精,受精卵在水温20.0 ~21.0℃条件下,于300 L玻璃钢水槽循环水中孵化.参考暗纹东方鲀(Takifugu obscure)、青鳉(Oryzias layioes)和斑马鱼(Barchydanio rerio var)胚胎发育分期形态指标,按分裂球数目、大小,胚盘形状、延展、下包,神经系统发育,体节数目,视觉和听觉器官的发育以及血液循环系统的不同发育阶段,记录了星点东方纯完整的胚胎发育过程.研究结果表明,星点东方纯受精卵卵径约为756~863μm,胚胎发育可分为33期,主要分期与对应时间点为:2细胞期:受精后1 h 40 min;囊胚期:受精后8 h6min;原肠期:受精后13 h 48 min;心脏原基期:受精后58h 45 min;孵化期:受精后99 h 31 min;初孵仔鱼期:受精后108 h 31 min.值得注意的是,在32细胞期,观察到了与青鳉相同的边缘细胞和部分水平分裂.本实验中的星点东方纯卵径在东方纯属鱼中是最小的,也明显小于日本的星点东方鲀.本研究星点东方纯胚胎发育不仅快于暗纹东方纯和红鳍东方纯(Takifgu rubripes),而且大大快于日本种群.
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北半球准定常行星波经向结构及特征尺度分析
《北京师范大学学报(自然科学版) 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：准定常行星波对于热带外地区的天气和气候有着举足轻重的影响.以往对于准定常行星波的研究主要针对某一纬度或多纬度平均的纬向波动进行分析,因此准定常行星波的经向结构及特征尺度尚不清楚.利用经典的Rossby波的频散关系,对传统定常波的水平全波数的计算方法进行了改进,将纬向和经向波数进行分离,得到了描述准定常行星波运动学特征的纬向和经向特征波数,从理论上给出了准定常行星波空间尺度的动力约束条件,进而对北半球行星波动的经向结构及特征空间尺度进行了分析.结果表明:在北半球热带外地区,冬季准定常行星波的经向尺度以1波为主,表明准定常行星波的经向结构多为偶极子型;而纬向波数随纬度的增高而减小,表明大尺度的准定常波可以在高纬度传播,而较小尺度的准定常波只能在较低纬度传播.进一步利用大气环流观测资料分析冬季不同纬度间准定常行星波(纬向1～3波)的位相关系,发现不同纬度间的准定常行星波以反位相关系为主,且行星波的经向活动区域随着纬向波数的减小而向极地延伸.观测得到的冬季准定常行星波的纬向和经向结构特征,与理论推导的纬向和经向特征波数的时空分布特征基本对应.
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基于高通量测序的长蛸不同组织转录组比较分析
《海洋湖沼通报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：为满足标记辅助育种的要求,利用高通量PE150测序技术首次开展了长蛸五个不同组织的转录组测序,并用Newbler等软件进行转录本的组装以及转录本的功能注释.结果表明:共获得了共获得268227814条reads,总碱基数为273451253bp,共得到个基因,平均基因长度为795bp,N50为1236bp,最大基因长度为18893bp,最小的基因长度为201bp,结果有82295条unigene注释到GO,32725个unigene注释到KEGG数据库,52035个unigene注释到SwissProt数据库,共鉴定出57685个具有完整的ORF的全长cDNA序列.鉴定出136009个微卫星和138417个SNP位点,这为深入开展长蛸分子标记辅助的遗传育种、种群遗传学和资源评估等研究提供了丰富的标记资源.
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泰国渔业发展状况及中泰渔业合作潜力探讨
《淡水渔业 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：渔业合作是我国构建"一带一路"的战略举措,泰国是连通"一带"和"一路"的交汇点,在我国与东盟合作中有着重要的战略支点作用.泰国渔业产业格局由最初的以海洋捕捞业为主逐渐发展为水产养殖与捕捞并驾齐驱的态势.其国内渔业和水产养殖由渔业局(DOF)负责管理,渔业科技水平较高,渔业技术服务推广体系较为完善.现行渔业管理体制包括 《渔业法案》 和危害分析与关键控制点(HACCP)检验项目,对虾养殖须遵守 《优质对虾生产行为守则》(CoC)及 《良好水产养殖操作行为守则》(GAP).根据中泰渔业发展趋势及发展需求,提出加强政府部门顶层设计、 构建"项目-人才-平台-基地"科技合作模式及人才支撑体系及构建中泰渔业科技合作项目等建议,旨在为中泰渔业合作政策制定提供参考依据.
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渤海湾条斑紫菜养殖的初步研究
《海洋湖沼通报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：本文对2017年11月下旬至2018年5月上旬在渤海湾养殖的条斑紫菜进行整个生长周期(1月中旬-3月中旬结冰期除外)的取样调查,并对其生长的海域环境因子进行实时监测.通过对头茬紫菜的生长状况与环境因子数据进行分析,初步证实,条斑紫菜适宜在渤海湾海域生长,水温、盐度、pH和亚硝酸盐是限制其生长的重要环境因子,如若在该海域环境条件适宜时及时张挂网帘,其生长期可延长至5个月左右.调查还发现,如何渡过冬季结冰期是该海域条斑紫菜养殖亟待解决的关键问题,本文亦提出两种方案,效果如何还有待进一步试验论证.
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红鳍东方鲀精原干细胞鉴定、分离及纯化
《水生生物学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：为获得高比例精原干细胞,开展了不同月龄红鳍东方鲀精原干细胞分离纯化研究.采用组合酶消化法制备不同月龄的精巢单细胞悬液,通过形态学观察和生殖细胞特异基因vasa免疫荧光鉴别精原干细胞,Percoll不连续梯度(10%、30%和50%)纯化精原干细胞.结果显示:14月龄雄鱼精巢生殖细胞主要为A型精原细胞,精原干细胞占比极显著性地高于22月龄(P<0.05).纯化后精原干细胞主要分布在10%—30%Percoll梯度带中,14月龄雄鱼生殖细胞主要分布在此层,且纯化后精原干细胞占比远高于纯化前以及22月龄纯化前后.结果表明,14月龄更适用组合酶消化分离,并通过Percoll梯度离心法获得高比例的红鳍东方鲀精原干细胞.
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