通过DNA改组技术获得高活性β-葡萄糖苷酸酶

熊爱生; 姚泉洪; 彭日荷; 陈建民; 李贤; 范惠琴; 《中国生物化学与分子生物学报 》 2003 北大核心 CSCD

摘要：β 葡萄糖苷酸酶是在植物转基因中广泛应用的报告基因 .以质粒pBI12 1中的GUS基因为基础 ,利用DNA改组方法 ,经DNaseⅠ降解 ,PrimerlessPCR ,PrimerPCR对GUS基因进行了突变和改组 ,然后将改组的GUS基因连接到原核表达载体pG2 5 1中 ,构建了库容为 10 8的突变体库 .经过活性的筛选 ,得到活性提高的克隆 ,再以此为基础 ,经过新的改组、筛选得到活性大幅度提高的克隆GUS2 4 .基因测序显示 ,GUS2 4与GUS基因之间的同源性为 99 7% ,共有 6个核苷酸位点发生了改变 ,分别是 :379位的A突变为G ,396位的T突变为C ,711位的G突变为A ,95 8位T突变为C ,990位的T突变为C ,1649位的A突变为G .核苷酸序列推导的氨基酸序列显示 ,3个氨基酸发生了突变 ,12 7位的Ser突变为Gly ,32 0位的Trp突变为Arg ,5 5 0位的Asn突变为Ser.X gluc染色检测和荧光测活结果显示GUS2 4基因表达的 β 葡萄糖苷酸酶基较GUS基因表达产物活性提高 3倍

关键词： β-葡萄糖苷酸酶 DNA改组 体外分子进化

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西瓜蔓枯病菌子实体的诱导及抗性鉴定

戴富明; 陆金萍; 顾卫红; 周蓓琪; 徐同; 《植物保护学报 》 2003 北大核心 CSCD

摘要：在26～28℃,12h光照/12h黑暗的条件下,西瓜蔓枯病菌Didymella bryoniae在西瓜叶汁B培养基上培养3周左右,能形成大量黄褐色的小点即分生孢子器;而在21～23℃,12h光照(40W荧光灯)/12h黑暗的条件下培养,在西瓜叶汁C培养基能大量形成黑色小点即子囊座。来源不同的蔓枯病菌对西瓜的致病力差异显著。用致病力最强的蔓枯病病菌菌株XD-99-04-29-01 2～4×10~5孢子/ml孢子液,喷雾接种3～4叶期的西瓜苗,保湿120h,20个被鉴定的国内外西瓜组合/品种的蔓枯病病情指数在15～50,差异明显。对美国的4个品种的抗病性鉴定结果与先前的报道一致。

关键词： 瓜类蔓枯病菌 子实体诱导 西瓜 抗性鉴定

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海南吊罗山已知食(药)用菌和毒菌(续完)

李泰辉; 邓旺秋; 宋斌; 杨祝良; 曹晖; 陈学波; 梁绍华; 《中国食用菌 》 2003 北大核心

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牛IL-2cDNA缺失突变的矫正及表达产物生物学活性测定

李春华; 李祥瑞; 魏晓锋; 徐立新; 李震; 陈芳; 《南京农业大学学报 》 2003 北大核心 CSCD

摘要：根据GenBank中的牛IL 2基因序列 ,设计一对引物Pa和Pd ,以牛外周血淋巴细胞为材料 ,用RT PCR方法扩增得到牛IL 2cDNA ,测序发现在扩增产物的第 2 4 0位缺失了一个A碱基。采用重叠延伸剪接术 (SOE法 )向突变体定点插入该碱基 ,然后与表达载体连接 ,获得了正确的表达产物。经RT PCR检测证明 ,重组的牛IL 2蛋白具有较好的生物学活性 ,能诱导肿瘤坏死因子TNF α和干扰素IFN γ的产生。

关键词： 牛白细胞介素2(IL-2)基因 重叠延伸剪接术 定点突变 表达

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草菇蛋白酶的分离、纯化及等电点的测定

李世贵; 陈明杰; 《菌物系统 》 2003 北大核心 CSCD

摘要：草菇是我国食用菌主要栽培品种之一,属典型高温真菌。低温将诱导草菇细胞内的蛋白质降解,导致草菇菌丝自溶、死亡。蛋白酶在草菇低温自溶过程中起了重要作用。在分离、纯化草菇蛋白酶的基础上,采用等电点聚焦电泳测定了蛋白酶的等电点,为草菇低温自溶与蛋白酶之间的关系的研究奠定了基础。

关键词： 草菇 蛋白酶 等电点 低温 自溶

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水稻重要农艺性状的两年QTL剖析

郭龙彪; 罗利军; 邢永忠; 徐才国; 梅捍卫; 王一平; 钟代彬; 钱前; 应存山; 石春海; 《中国水稻科学 》 2003 北大核心 CSCD

摘要：利用水稻汕优 6 3(珍汕 97×明恢 6 3)重组自交系群体 2 41个株系 ,对株高、生育期、产量及其产量构成因子等 9个重要农艺性状进行了年度间的QTL定位和比较。结果表明 ,9个性状的表现型在两年均为连续分布 ,且都存在一定数量的双向超亲遗传类型。两年共检测到 6 4个QTL ,分布于水稻除第 4染色体外的其余 11条染色体 ,其中 1999年检测到 45个 ,2 0 0 0年检测到 35个 ,两年相同的QTL共 16个。 2 0 0 0年检测到的QTL贡献率介于 2 83%～ 14 99%,且大多低于 1999年。不同环境可以影响QTL的表达 ,但表达差异并不全是QTL×环境 (QE)互作结果 ,也可能是由于该性状的遗传力偏低、QTL本身效应偏低或QE互作等原因共同造成的。另外 ,检测到 8个显著的QE互作 ,但其互作效应明显低于对应的QTL效应。

关键词： 水稻 重组自交系 数量性状位点 农艺性状 互作

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水稻穗部突变体Cl的形态和定位分析

郑雷英; 朱旭东; 钱前; 赵忠; 张建军; 胡筱荷; 林鸿宣; 罗达; 《科学通报 》 2003 北大核心 CSCD

摘要：簇生穗突变体Cl表型为多数枝梗顶端有2或3个小穗簇生在一起.利用扫描电子显微镜观察显示,Cl的功能与水稻枝梗顶部的发育有关,同时Cl影响了顶端小穗的伸长;而Cl突变体中穗粒数有一定降低,提示Cl基因可能对水稻穗粒数也有一定的影响.分别利用Cl与中花11及Cl与浙辐802杂交的F2群体对Cl位点进行遗传定位,Cl位点初步定位在第6染色体的CAPS标记CK0214和SS0324之间.为了进一步精细定位Cl位点,在CK0214和SS0324之间发展了5个CAPS标记,连锁分析表明,Cl与其中2个标记R0674E和C12560紧密连锁,遗传距离分别为0.2和2.1 cM,并且Cl被定位在这两个标记之间.以此为起点,构建覆盖Cl基因区域的PAC重叠群,两个PAC克隆AP004571和AP004236将Cl位点覆盖,物理距离为196 kb,为最终克隆Cl基因奠定了基础.等位性测定显示,Cl与另一个水稻簇生穗突变体Cl2是等位突变.

关键词： 水稻(Oryza sativa) 簇生穗突变体 SEM 基因定位 分子标记 等位性测定

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灵芝生产用种的亲缘关系研究

赵明文; 陈明杰; 王南; 梁婉琪; 尚晓冬; 王晨光; 曹哲民; 张大兵; 潘迎捷; 《南京农业大学学报 》 2003 北大核心 CSCD

摘要：利用RAPD技术对生产中常用的灵芝属 8个菌株的亲缘关系进行了分析。根据UPGMA构建的树状图表明 :8个菌株在较低的相似水平上可以分成 3个明显不同的组 :第 1组包括黑芝 (Ganodermaatrum)、松杉灵芝 (Ganodermatsugae)、圆芝 (Ganodermarotundatum)、灵芝 0 770 (Ganodermalucidum 0 770 )和韩国灵芝 (GanodermalucidumHG) ;第 2组包括密纹灵芝 (Ganodermacrebrostriatum)和紫灵芝 (Ganodermasinense) ;第 3组为树舌灵芝 (Ganodermaapplanatum)。这一结果与经典分类结果基本相符 ,表明RAPD技术可以用来区分生产中一些常用的灵芝种 ,同时说明灵芝生产用种之间遗传差异较大 ,可能是造成灵芝产品研究比较混乱的重要原因。

关键词： 灵芝 随机扩增多态性DNA 亲缘关系

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T-DNA插入水稻群体中卷叶突变体R1-A2的遗传分析

沈革志; 王新其; 殷丽青; 王江; 李琳; 张景六; 《实验生物学报 》 2003 北大核心 CSCD

摘要：在根癌农杆菌介导的T-DNA(携带有除草剂Basta抗性基因bar和Ds因子)转化中花11水稻群体中,获得了一个叶片发生明显内卷的突变体R1-A。经过连续三代的分离鉴定,获得突变体的纯合株(R1-A2),并与中花11号进行杂交,在调查的36个F_1植株中,全部表现为卷叶,并对Basta除草剂都表现为抗性。在852个F_2单株中,卷叶为645株,正常叶207株,卷叶和正常叶的比例为3:1,其中,卷叶株均对Basta表现抗性,正常叶株均对Basta表现敏感,表明卷叶性状和Basta抗性存在着共分离关系。用扩增Ds因子的引物,对F_2中45个卷叶抗性株进行PCR鉴定,都获得预期长度的Ds因子片段,进一步表明在这些卷叶的植株中都有T-DNA的插入;而30个正常叶敏感株都不能检测到Ds的特征片段。在以卷叶突变(R1-A2)为回交亲本的F_1B_1植株中,全部植株表现卷叶;在以中花11号为回交亲本的F_1B_1植株中,卷叶和正常叶植株的分离比为1:1。上述结果表明该卷叶突变是个显性突变,受一个基因所控制,且该基因的突变与T-DNA的插入有关。

关键词： 水稻 T-DNA插入 卷叶突变

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酯酶同工酶及RAPD技术在香菇杂种优势研究中的应用

赵勇; 贺冬梅; 温亚丽; 陈明杰; 谭琦; 潘迎捷; 《菌物系统 》 2003 北大核心 CSCD

摘要：采用酯酶同工酶及RAPD技术对香菇3个亲本双核体(苏香、野生46#、野生80#)及其10个单核体、以及它们的10个杂交后代进行了遗传差异和亲缘关系的研究,同时针对亲本单核体酯酶同工酶标记和RAPD标记遗传距离、以及杂交子和亲本单核体RAPD标记遗传距离与香菇产量超亲优势进行了相关性分析。结果表明,酯酶同工酶和RAPD技术都可进行香菇杂种优势群的划分研究,但RAPD标记检测的多态性要远远高于酯酶同工酶标记。相关分析结果表明,亲本单核体酯酶同工酶标记遗传距离与香菇产量超亲优势无相关性,而RAPD标记遗传距离与其存在极显著正相关;杂交子和以苏香为来源的单核体亲本之间RAPD标记遗传距离与香菇产量超亲优势也存在极显著正相关,而杂交子和以野生46#、野生80#为来源的单核体亲本之间RAPD标记遗传距离与其相关不显著。

关键词： 亲本单核体 杂交子 遗传距离 产量超亲优势 多态性

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