科研产出
苹果多酚氧化酶双链RNA干扰(RNAi)研究
《实验生物学报 》 2004 北大核心 CSCD
摘要:以成熟苹果果实的RNA为模板,经RT-PCR扩增并克隆苹果多酚氧化酶(APPO)长度为710bp的反义、正义基因片段。以副球菌中类胡罗卜素合成有关的(crtW+crtY)融合基因片段YYT为间隔区,将APPO反义基因片段、YYT和APPO正义基因片段串联,构成全长为2446bp的DNA并插入到植物双元载体pYPX145中,构成可表达苹果多酚氧化酶双链RNA的植物双元载体pYF7704。以根癌农杆菌介导的叶盘转化法转化苹果栽培品种红富士,通过50mg/L卡那霉素筛选和CUS检测,获得了转基因苹果抗性芽。荧光定量RT-PCR检测结果显示,转基因苹果抗性芽内多酚氧化酶基因的干扰效果达91.69%以上,研究结果证实多酚氧化酶双链RNA干扰在转基因苹果上是可行的。
关键词: 双链RNAi APPO基因 载体构建 遗传转化 苹果 荧光定量 RT-PCR
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白僵菌Bb98土壤培养方法的优化
《华中农业大学学报 》 2004 北大核心 CSCD
摘要:采用液固双相发酵技术 ,对白僵菌的培养进行了液体接种、固体配方筛选和固体培养发酵抗污染试验。结果表明 ,加有土样成分配方比传统配方可降低生产成本 ,简化操作方法 ,而且具有一定的抗污染作用。
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新城疫热稳定性天然弱毒B95株核酸疫苗的构建
《中国兽医科技 》 2004 北大核心 CSCD
摘要:将含有新城疫热稳定性天然弱毒B95株F基因的重组克隆质粒 pGEM F用NotⅠ单酶切 ,电泳回收纯化目的片段 ,与同样用NotⅠ单酶切并经去磷酸化处理的真核表达载体 pcDNA3.1连接 ,构建了新城疫核酸疫苗 ,并用所构建的新城疫核酸疫苗与载基因阳离子脂质体结合进行了免疫试验 ,通过ELISA、淋巴细胞转化试验检测了核酸疫苗在鸡体内的表达。结果显示 ,表达产物作为抗原物质刺激机体产生了特异性应答反应 ,引起了机体特异性的体液免疫和细胞免疫 ,对新城疫强毒攻击的保护率为 75 %。
灵芝子实体和菌丝体的提取物及其各纯化组份生物活性的比较
《菌物学报 》 2004 北大核心 CSCD
摘要:从不同品种的灵芝中筛选出了多糖含量最高的菌株GL2为材料,利用柱层析技术从子实体和菌丝体提取物中分离得到多个组分。实验发现子实体组分P3,P31及P32对人白血病细胞株K562的生长有明显地抑制作用,这三个组分中只有P32对另一白血病细胞株HL-60有抑制作用。免疫活性测试的结果显示子实体各组分在刺激小鼠脾淋巴细胞,T和B细胞的增殖,提高人外周血中NK细胞杀伤活性方面比菌丝体的作用强;进一步的实验发现子实体与菌丝体相应组分在刺激人外周血中的T和B淋巴细胞增殖方面的活性差异不大。子实体和菌丝体提取物各组份均可剂量依赖型的促进PBMC分泌TNF-α。菌丝体提取物各组分对TNF-释放量的影响在低浓度时与子实体各组份相当,在高浓度时要明显好于赤芝子实体提取物各组分。
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猪PPAR基因多态性与脂肪性状相关的初步研究
《江苏农业科学 》 2004 北大核心
摘要:以长×长×梅和长×大×二两个含 2 5 %太湖猪血统的杂交猪群为试验材料 ,用PCR -SSCP法检测了猪PPAR基因 ,结果在长×长×梅中发现AA、BB、AB三种基因型 ,在长×大×二猪中只发现AA和AB两种基因型。本研究还将 3种基因型与背膘等屠体脂肪性状进行方差分析 ,结果表明 :除肌内脂AA型高于AB型和BB型外 ,其他的脂肪性状AB型猪较其他型猪略高 ,但差异不显著。这提示我们 ,PPARγ1 基因中Met5 9Val突变也许并不适合作为猪的脂肪性状的候选基因 (遗传标记 ) ,或者需要在该基因的其他位置寻找新的单核酸多态性位点 ,继续探索PPAR基因对猪脂肪性状的影响。
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