科研产出
LPS对鹅等级卵泡基质层TLR家族基因表达的影响
《中国农业科学 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：【目的】研究鹅卵泡基质层TLR家族基因表达谱及其对LPS不同处理时间后的反应性。【方法】在大群散养条件下,实时观察鹅产蛋过程,分别在产蛋后8和2 h以及产前4、16和28 h注射LPS,并在产蛋后8h屠宰,即LPS作用0、6、12、24和36 h,每个时间点各5只鹅。屠宰时,取卵巢,观察卵泡外观形态,并分离F1-F5级卵泡基质层。试验鹅自由饮水、自由采食、自然光照。LPS处理0、24和36 h的单个F1-F5级卵泡基质层或卵泡用于基因表达分析,而其他LPS处理的每只鹅等级卵泡基质层RNA等质量混合后用于基因表达分析。采用普通PCR方法检测10种鸟类TLR家族基因的在鹅等级卵泡基质层的表达谱,其中以脾脏组织为阳性对照,以不加c DNA模板为阴性对照。根据RT-PCR的表达谱结果,采用Real-time PCR检测不同等级卵泡基质层TLRs表达水平以及不同LPS处理时间对基质层TLRs表达水平的影响。对不同等级卵泡和不同LPS处理时间对基质层TLRs表达的数据,采用单因子方差分析,Duncan法多重比较;对变性卵泡与对照组基质层TLRs表达水平的数据,采用T检验分析。【结果】(1)已公开的10种鸟类TLR家族基因,如TLRs 1A、1B、2A、2B、3、4、5、7、15和21基因均在等级卵泡基质层组织中表达。(2)随等级卵泡生长,TLRs 2A和15表达水平逐渐升高;F1级卵泡基质层TLR2A表达水平显著高于F3、F4和F5级卵泡,TLR15表达水平显著高于F5级卵泡;其他TLR家族基因,如TLRs 1A、1B、2B、3、4、5、7和21在不同等级卵泡基质层中的表达水平差异不显著。(3)在LPS处理0、6和12 h时,等级卵泡外观形态无明显变化,但在LPS处理24 h时,3只鹅的等级卵泡呈深黄色胶冻状变性;在LPS处理36 h时,全部试验鹅等级卵泡呈深黄色胶冻状变性。(4)与对照组(LPS处理0 h)相比,TLRs 2A、4和5表达水平在LPS处理12和24 h时显著升高,TLR2B表达水平在LPS处理24 h时显著升高,TLRs 7和15表达水平在LPS处理6-24 h期间均显著升高,而TLRs 1A、1B、3和21表达水平在LPS处理6-24 h期间差异不显著。(5)与等级卵泡基质层相比,在LPS处理24和36 h的变性卵泡中,TLRs 1A、2A、2B、4、5、7和15表达水平显著升高,TLR3表达水平显著降低,而在LPS处理36 h的变性卵泡中,TLRs 1B和21表达水平显著升高。【结论】已发现的10种鸟类TLR家族基因均在种鹅等级卵泡基质层表达,且随LPS作用时间延长,等级卵泡形态结构发生变化,但TLRs表达水平逐渐升高。
关键词： 种鹅 等级卵泡 内毒素脂多糖(LPS) TLRs
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猪捷申病毒的分离鉴定及其VP1基因的序列分析
《中国兽医杂志 》 2017 北大核心
摘要：应用PK细胞,从临床症状上表现为腹泻的仔猪肠内容物中分离到一株病毒,对该病毒进行RT-PCR检测,证明该病毒为猪捷申病毒(PTV),命名为PTVJS2013。对该病毒进行细胞半数感染量(TCID50)测定,动物试验以及VP1蛋白基因序列测定,并与国内外16株不同血清型PTV的VP1基因序列进行了同源性比较及系统进化树分析。结果表明,猪捷申病毒JS2013 VP1基因核苷酸与8型血清型PTV同源性达到99.6%。而与其他血清型的PTV VP1基因核苷酸的同源性仅在58.3%~74.7%之间;与国内分离的PTV-Jilin/2003/2(JN710381/PTV-8)和PTV-Fuyu/2009(HQ020378/PTV-8)亲缘关系最近,同属于PTV-8血清型一个分支。
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坦布苏病毒囊膜蛋白诱导的小鼠免疫应答
《华北农学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：为了研究坦布苏病毒囊膜蛋白(E蛋白)的免疫原性,利用大肠杆菌表达系统高效表达坦布苏病毒囊膜蛋白(E蛋白)并对其诱导小鼠免疫应答进行了研究。结果表明,E蛋白免疫BALB/c小鼠后,免疫组小鼠血清中抗体效价均可达1∶51 200以上;同时,E蛋白可显著诱导血清中细胞因子IL-2、TNF-α和IFN-γ的表达,免疫组小鼠血清中IL-2、TNF-α的含量均极显著高于对照组(P<0.01),IFN-γ含量则显著高于对照组(P<0.05);此外,与对照组相比,E蛋白还可极显著刺激小鼠脾脏淋巴细胞的增殖,上述结果表明,E蛋白免疫后,小鼠机体可产生显著的体液免疫和细胞免疫反应。攻毒保护性试验结果显示,攻毒后,经荧光定量RT-PCR检测,E蛋白免疫组小鼠脑、肝脏、脾脏、卵巢、肾脏中坦布苏病毒载量均显著低于对照组,表明免疫E蛋白可有效抑制坦布苏病毒在小鼠各个组织中的增殖。结果表明,大肠杆菌表达的坦布苏病毒E蛋白可作为坦布苏病毒亚单位疫苗的候选抗原,为进一步预防和控制坦布苏病毒病奠定理论基础。
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江苏部分地区牛源无乳链球菌流行病学研究
《扬州大学学报(农业与生命科学版) 》 2017 北大核心
摘要：对江苏省部分地区的7个规模化奶牛场进行采样,通过16S rNDA测序、多位点序列分型、荚膜分型,明确无乳链球菌的流行情况及流行株类型;并通过检测毒力因子,分析菌株生化特性、溶血能力及耐药性,明确无乳链球菌流行株的生物学特性及致病因子。结果表明:自327份乳房炎奶样中共分离到84株无乳链球菌,该菌在不同奶牛场中的阳性率存在较大差异(阳性率为0~51.3%),主要流行株类型为ST67、ST103及ST568型菌株;牛源菌株的荚膜分型为Ⅰa型或Ⅱ型,均具有PI-2b型菌毛及乳糖操纵子,能够代谢乳糖,且具有不同的溶血能力;另外,所有牛源菌株对头孢噻肟均未产生耐药性。这一研究为无乳链球菌在奶牛场中的临床监测和防控提供了重要信息,有助于进一步阐明该菌的致病机制。
关键词： 奶牛 无乳链球菌 多位点序列分型 毒力因子 生化特性 耐药性
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混料设计在即食文蛤调味液配方研究中的应用
《食品研究与开发 》 2017 北大核心
摘要：以盐、花椒、辣椒、料酒、葱+姜+蒜、水为主要调味原料,采用混料设计研究调味液配方中各成分的不同组合对即食文蛤调味的感官质量影响,建立各成分配比与产品感官质量之间的回归模型,考查配方中各组分的互作效应。获得了即食文蛤调味液的最优配方为:盐4.0%、花椒4.0%、辣椒4.0%、料酒3.5%、葱+姜+蒜(质量比1∶1∶1)8.7%、水75.8%用此调味液浸泡文蛤,获得感官评分为99.3分,与预测值基本一致,模型可靠。
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应用NaOH制备胸膜肺炎放线杆菌菌影方法的建立
《中国兽医科学 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：将培养12、24、48和72 h的胸膜肺炎放线杆菌血清1型shope菌株的菌液浓度分别调至1×10~8和1×10~9CFU/m L,测定氢氧化钠(NaOH)对其最小抑菌浓度;将不同培养时间、2种浓度的菌液与对应的最小抑菌浓度NaOH混合,37℃孵育75 min;间隔取样,对细菌形态学、裂解情况进行观察,确定制备菌影的条件。结果显示,NaOH对各培养时长、2种浓度的胸膜肺炎放线杆菌血清1型菌液均有裂解效果,37℃作用75 min,均未能检测到活菌,裂解率可达到100%。通过扫描电镜观察发现,细菌菌体形态完好、外膜孔道明显。结果表明,用NaOH成功地制备了胸膜肺炎放线杆菌菌影,这种新型制备菌影的方法安全、高效,为日后该菌菌影疫苗的生产与应用奠定了基础。
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禽脑脊髓炎病毒HMM08株的分离鉴定及生物学特性研究
《中国家禽 》 2017 北大核心
摘要：为明确禽脑脊髓炎(AE)病毒自分离流行毒株的生物学特性,以用于禽脑脊髓炎灭活疫苗的研制,以发病雏鸡脑组织为材料,进行SPF鸡回归试验、PCR检测、SPF鸡胚分离培养有限稀释纯化、特异性试验等,得到一株禽脑脊髓炎病毒,命名为HM08株,对该分离毒株的生物学特性进行研究的结果表明:该毒株纯净、无外源病毒污染,E1代病毒含量达到10~(5.56)EID_(50)/0.2 mL,E2代至E15代病毒含量稳定在10~(7.0)EID_(50)/0.2 mL以上;100倍稀释的E1代毒种,经卵黄囊途径接种6日胚龄SPF鸡胚,12 d内,引起AE特征性病变的病变率达100%;用E1代毒按照500 EID50/只对1日龄、7周龄的SPF鸡脑内接种,出现AE特征性病变的病变率达100%;以该毒制成的疫苗0.3 mL/羽份免疫鸡,能获得100%保护。表明HM08株是一株较好的AE疫苗候选毒株。
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植物SnRKs家族在胁迫信号通路中的调节作用
《植物学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：蔗糖非发酵1(SNF1)相关蛋白激酶家族(SnRKs)是植物胁迫响应过程中的一类关键蛋白激酶。在响应生物胁迫时,SnRKs可通过参与活性氧和水杨酸介导的信号转导途径,增强植物对生物侵害的耐受性。在响应非生物胁迫时,SnRKs通过脱落酸(ABA)介导的信号通路,增强植株对干旱、盐碱和高温等的耐受性;且通过独立于ABA的信号通路,SnRKs可调控胞内能量状态,维持离子平衡。该文总结了SnRKs蛋白激酶作为胁迫信号通路中的主要调节因子的最新研究进展,并展望了未来的研究方向。
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猪圆环病毒2型荧光抗体的原核表达及初步应用
《江苏农业学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：本研究旨在利用原核大肠杆菌系统表达1株猪圆环2型病毒(Porcine circovirus type 2,PCV2)小分子荧光抗体,以及该荧光抗体用于PCV2病毒直接免疫荧光(Direct immunofluorescence assay,DIF)检测。选取1株筛选到的PCV2特异性纳米抗体基因V22,按照E.coli原核表达系统进行密码子优化重新合成,与荧光蛋白基因融合后插入p ET28(a)中,20℃条件下诱导表达16 h,利用SDS-PAGE、Western-blot技术鉴定蛋白是否表达及其可溶性,并对可溶荧光抗体蛋白进行镍柱亲和层析纯化,纯化蛋白用于建立PCV2特异性DIF检测方法,同时对其工作条件、工作浓度、特异性以及稳定性进行验证,并与PCV2经典间接免疫荧光检测方法进行比较,验证其灵敏度。结果表明,PCV2荧光抗体基因在E.coli原核表达系统中表达,可溶蛋白占目的蛋白的60%左右;纯化后荧光抗体蛋白呈现明显绿色,具有良好的荧光活性,不同批次表达及纯化的荧光抗体效果一致,-20℃保存6个月后抗体效价不变;PCV2特异性DIF试验结果表明该荧光抗体只对PCV2病毒感染细胞具有良好的反应原性,利用该抗体建立的直接免疫荧光法能够用于PCV2病毒滴度的测定,滴度测定结果与间接免疫荧光法检测结果一致。说明,在原核系统中成功表达PCV2的小分子荧光抗体,该荧光抗体蛋白具有良好的特异性、灵敏度及稳定性,用该抗体建立的PCV2特异性DIF操作简单,且具有较好的特异性和敏感性,对PCV2的检测有潜在应用价值。
关键词： 猪圆环病毒2型(PCV2) 荧光抗体 原核表达 直接免疫荧光检测
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基于Solidworks的果园施肥机中螺旋投料系统设计
《江苏农业科学 》 2017 北大核心
摘要：针对果园施肥机工作要求以及投送物料特性,设计一种卧式等螺距螺旋给料搅龙。对装置进行理论计算,并开发设计"螺旋搅龙快速计算系统",简化设计流程,完成螺旋直径为90 mm、螺距为72 mm、螺旋轴外径为36 mm、螺旋转速为85 r/min的给料搅龙设计;使用Solidworks进行三维实体造型,利用Solidworks simulation进行三维实体的静力与模态分析,最大应力小于屈服应力,螺旋给料搅龙第一阶频率,即基本频率为336.59 Hz,满足设计与使用要求。本研究将提高果园施肥机的工作可靠性与稳定性,并可为其他螺旋输送机构的设计提供参考。
关键词： 果园施肥机 螺旋投料系统 Solidworks 螺旋给料搅龙 最大应力 屈服应力 有限元分析
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