科研产出
基于转录组测序的ITGAD基因InDel位点鉴定及其与山羊生长性状的关联性分析
《农业生物技术学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：β2整合素αD(β2 integrinsαD,ITGAD)是一种异二聚体细胞表面受体的亚基,在调控脂肪新陈代谢和血糖平衡中发挥重要作用.为了加快山羊(Capra hircus)生长性状选育的遗传进展,为山羊生长性状的标记辅助选择(marker assisted selection,MAS)提供理论依据,本研究利用DNA池技术和高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)分析技术,检测了ITGAD基因在3个山羊品种(共355只)的插入/缺失(Insertion/Deletion,InDel)多态性,并分析其与山羊生长性状之间的关联效应.结果表明,检测到1个山羊ITGAD基因第15个内含子的新InDel位点(NC_030832.1:g.15243_15244 ins C),其多态信息含量(PIC)为0.289~0.369,并且该位点在3个品种中都处于哈迪-温伯格平衡状态;在与生长性状的关联分析中,该位点与福清山羊的尻宽和简阳大耳羊的体高、体长和胸围均显著相关(P<0.05),与简阳大耳羊的胸深、胸宽、管围、尻宽和管围指数极显著相关(P<0.01),并且II基因型个体显著优于DD基因型.本研究发现ITGAD基因InDel位点与山羊生长性状有显著的关联效应,为山羊生产性状的分子遗传标记选择提供参考依据.
关键词： 山羊 β2整合素αD (ITGAD)基因 插入缺失(InDel) 高分辨率熔解曲线(HRM) 生长性状
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大豆胶孢炭疽菌对苯醚甲环唑的抗性机制及其抗性突变体的适合度
《植物保护学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为明确大豆胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides对苯醚甲环唑的抗性风险及其抗性机制,采用药剂驯化法诱导获得其抗性突变体,并测定抗性突变体的适合度和交互抗性,同时分析抗性突变体和敏感菌株cyp51A和cyp51B基因的cDNA序列i、启动区序列及相对表达量.结果表明:从大豆胶孢炭疽菌2株敏感菌株中筛选获得7株低抗苯醚甲环唑的突变体,突变频率为1.75×10-4,其抗药性可以稳定遗传.抗性突变体与亲本敏感菌株在对温度的敏感性、菌丝生长速率、产孢量和致病力方面均存在一定差异.苯醚甲环唑与丙环唑之间存在中等交互抗性(相关系数为0.80,P<0.05),苯醚甲环唑与咪鲜胺锰盐、多菌灵、氟啶胺和吡唑醚菌酯之间无交互抗性.抗性突变体cyp51A和cyp51B基因的cDNA序列未发生核苷酸突变,cyp51A和cyp51B基因的启动区无插入片段.经苯醚甲环唑处理后,4株抗性突变体lq27-7-1、lq27-7-2、lq30-2-1和lq30-2-2的cyp51A基因相对表达量被诱导上调倍数显著高于亲本敏感菌株;3株抗性突变体lq27-7-2、lq30-2-2和lq30-2-3的cyp51B基因相对表达量被诱导上调倍数显著高于亲本敏感菌株.表明大豆胶孢炭疽菌对苯醚甲环唑的抗性风险为低至中等,其抗性机制可能与cyp51基因的过表达有关.
关键词： 大豆炭疽病 胶孢炭疽菌 苯醚甲环唑 抗性突变体 适合度 抗性机制
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乌龙茶水提物的膜分离制备及其体外抗氧化活性评价
《热带亚热带植物学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为探究乌龙茶水提液的不同膜分离工艺对产品品质、生化成分及体外抗氧化活性的影响,采用陶瓷膜(500 nm)和超滤膜(20、10、5、3.5 kD)对乌龙茶水提液进行分离,经喷雾干燥制得茶粉.通过感官品质、物理性质等方面评价不同膜分离工艺所制备的茶粉品质,并对茶粉的主要生化成分进行分析比较.同时,通过DPPH自由基清除力、FRAP氧化还原力、羟基自由基清除力、抗超氧阴离子活力方法评价茶粉的体外抗氧化活性.结果表明,陶瓷膜透过液的感官品质综合得分最高,体外抗氧化活性亦最高.500 nm陶瓷膜可有效分离与富集茶多酚(TPs)、游离氨基酸(FAAs)、咖啡碱(CAF)、可溶性糖(SPS)等物质,还可达到除杂效果,经陶瓷膜分离后的乌龙茶水提液再经超滤膜分离,对TPs、CAF、SPS、儿茶素组分无分离与富集效果.截留分子量小于10 kDa的超滤膜可有效分离与富集游离氨基酸.500 nm陶瓷膜截留液的SPS含量最高,但综合感官品质最差,抗氧化活性最低.基于品质、功效、节能3大要素考虑,500 nm陶瓷膜透过液制备的茶粉综合品质最优.
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伪狂犬病毒FJ 2012株感染湖羊肾脏的转录组谱特征及对FoxO通路的影响
《福建农林大学学报(自然科学版) 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：采用Illumina第二代高通量测序技术对感染伪狂犬病毒PRV FJ 2012株的湖羊肾脏组织进行转录组测序,对两组羊的差异表达基因进行筛选,差异显著性表达的基因进行GO和KEGG显著性富集分析,最后选择qPCR验证分析部分差异表达基因的mRNA表达情况.结果表明,PRV FJ 2012株感染湖羊,与对照组相比肾脏中共发现2679个差异表达基因,其中有1269个基因下调,1410个基因上调.GO显著性富集分析结果表明,PRV FJ 2012株感染湖羊肾脏涉及生物过程的差异表达基因最显著的GO生物学功能是蛋白质折叠,涉及细胞组分最显著的生物学功能是细胞核成分,涉及分子功能最显著的生物学功能是未折叠蛋白功能.KEGG分析表明,差异表达基因参与的代谢通路有316条,其中FoxO信号通路、IL-17信号通路、TNF信号通路差异最显著.本研究重点对FoxO通路的基因网络进行了分析,结果表明,该通路共有33个差异表达基因,其中22个下调,12个上调.qPCR验证结果表明,PRV FJ 2012株感染湖羊肾脏,基因STAT3、IL-6、FOXO3、BCL6、ATG8表达上调;基因IRS、SGK2、ATROGIN、PEPCK表达下调,其结果与FoxO信号通路转录组数据结果一致.
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7种可饲用植物营养成分分析
《饲料研究 》 2022 北大核心
摘要：试验旨在筛选反刍动物高质量植物饲料来源.选取7种可饲用植物(紫象草、牧草蔗、玉米秸秆、柠檬香茅、高丹草、构树、木豆)为研究对象,进行营养成分检测和分析.结果显示,木豆、高丹草(幼)、玉米秸秆的粗蛋白质含量较高;木豆、高丹草(幼)、构树的粗脂肪含量较高;构树、木豆、玉米秸秆的中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量较低;构树、木豆、高丹草(幼)的钙和磷含量较高.研究表明,木豆中粗蛋白质、粗脂肪含量显著高于其他6种可饲用植物,钙、磷含量位居第二,中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维含量低,是优质的可饲用植物.
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携带CRISPR/Cas9的重组腺联病毒对伪狂犬病病毒感染小鼠的治疗效应
《畜牧兽医学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)是猪伪狂犬病的病原.目前,针对该病毒有较多成熟的商品化疫苗,但病毒变异频繁,因而在生猪养殖中伪狂犬病的发生仍然较为普遍.如何清除宿主体内野毒是防控该病的关键所在.应用腺联病毒携载CRISPR/Cas9系统,以小鼠为动物模型,针对PRV的TK基因、gE基因和VP16基因进行剪切,减弱PRV毒力和复制能力,以期清除小鼠体内的PRV.结果表明,成功构建带有CRISPR/Cas9表达系统及相应sgRNA的pX601重组质粒(pXTK、pXGE、pXVP16);并包装成具有基因编辑功能的AAV-gE、AAV-VP16和AAV-TK病毒;经细胞水平和小鼠的感染试验,证实该方法能明显降低细胞和小鼠体内的PRV载量,并且延长小鼠存活时间,提高小鼠成活率,该治疗结果与治疗次数呈正相关.该小鼠模型的研究结果为猪伪狂犬病的临床治疗提供了新的借鉴.
关键词： 猪伪狂犬病病毒;CRISPR/Cas9;腺联病毒;治疗
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水稻黄绿叶突变体w08(YGL)基因精细定位与功能分析
《科学通报 》 2022 EI 北大核心 CSCD
摘要：水稻黄绿叶突变会显著影响水稻产量和稻米品质.研究黄绿叶突变体叶绿素变化机理对选育高光效品种,促进水稻增产具有重要意义.本研究以甲基磺酸乙酯（ethylmethylsulfone, EMS）诱变处理粳稻云引（YY）后发现的一个黄绿叶突变体w08（YGL）为材料,研究叶色突变对主要农艺性状、叶绿素含量、光合参数变化、水稻生理及亚显微结构的影响,并对该突变性状进行遗传分析、基因定位和功能验证.研究表明,突变体全生育期均表现为黄绿色.与野生型云引（YY）相比,突变体w08单株有效穗、结实率、千粒重分别降低46.7%、50.1%和18.3%,叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素含量分别下降41.2%、98.7%、17.5%.光合速率检测结果表明,突变体净光合速率（Pn）显著降低,而细胞间CO2（Ci）显著增加.对叶片叶绿体进行超微结构电子显微镜观察,结果发现,叶绿体内的类囊体基粒片层数目在突变体中明显减少.遗传分析结果表明,突变体黄绿叶性状为单基因遗传,受一对隐性核基因控制.利用突变体与雷蒙特（Lemont）杂交构建F2遗传群体,将该基因定位在10号染色体长臂GL8和T258两个标记之间,物理距离为60.2 kb,该区间包含14个候选基因.基因测序发现,该区间内的编码叶绿素酸酯氧化酶1（chlorophyllide a oxygenase1）蛋白的候选基因OsCAO1编码区CDS序列第957位碱基发生突变,形成一个终止密码子,使蛋白翻译提前终止.通过构建过表达和敲除载体进行转基因功能验证,进一步证实了OsCAO1基因功能.分析突变体中的激素含量和分蘖调控相关基因的表达,结果表明,突变体中水稻分蘖相关基因表达水平明显下降,生长素合成基因表达水平显著提高,水稻分蘖芽的生长素含量显著提高,从而证实OsCAO1基因突变抑制了水稻分蘖生长,使单株有效穗显著减少.
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110份梨种质资源对主要叶部病害的田间抗病性评价
《中国南方果树 》 2022 北大核心
摘要：在露地田间自然发病条件下，鉴定110份梨地方种质资源抗病性，筛选出多抗材料，为福建梨多抗品种选育奠定基础；根据病害症状确定病害的类别，调查主要危害福建梨叶片的3种病害（斑点炭疽病、黑斑病和褐斑病）的发病率和病情指数以及抗病性等级，利用模糊隶属函数法，综合评价种质材料抗病性。结果表明，110份梨地方资源全部发生斑点炭疽病、黑斑病和褐斑病；其中黑斑病发病最严重，110份材料均发生黑斑病，发病率达100%有73份，占所有材料的66.36%;其次为斑点炭疽病，62份材料发生斑点炭疽病，发病率达100%有58份，占比93.55%;褐斑病发病最轻，有99份材料发生褐斑病，其中发病率达100%仅8份，占所有材料的7.27%。对梨斑点炭疽病抗病等级以上的材料有64份，占总数的58.18%;对梨黑斑病抗病等级以上的材料有49份，占总数的44.55%;对梨褐斑病抗病等级以上的材料有101份，占总数的91.82%。结合种质资源的田间发病率及对3种病害的抗性，筛选出6份材料对3种叶部病害均达到高抗等级以上，分别为“武平粳米梨”“长汀秤砣梨”“连城八月白”“连江狗头梨”“长泰棕包梨”和“六月青3号”,可作为多抗梨种质资源应用于梨抗病品种选育。
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福建省大豆炭疽病病原菌的分离与鉴定
《植物保护学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为明确引起福建省大豆炭疽病的病原菌种类，2018—2019年从福建省福州、三明、莆田、泉州和南平市采集具有大豆炭疽病症状的大豆豆荚，采用组织分离法分离病原菌，结合形态学特征和多基因系统发育分析对病原菌进行鉴定。结果表明，从采集的豆荚样本中共分离获得152株炭疽菌菌株，经形态学初步鉴定分属于3种类型，从3种类型的病原菌中分别选取3株代表菌株进行多基因系统发育分析，这9株代表菌株分别与Colletotrichum plurivorum、平头炭疽菌C. truncatum和胶孢炭疽菌C. gloeosporioides聚在一起。形态学和多基因系统发育分析结果表明，引起福建省大豆炭疽病的病原菌有3种，分别为C. plurivorum、平头炭疽菌和胶孢炭疽菌，其占比分别为10.53%、50.00%、39.47%。致病性测定结果表明，C. plurivorum、平头炭疽菌和胶孢炭疽菌对大豆均有致病作用，但不同的菌株致病力存在差异。表明平头炭疽菌是引起福建省大豆炭疽病的主要病原菌，而C. plurivorum为引起我国大豆炭疽病的新纪录种。
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信号肽筛选优化提高耐热α-环糊精酶在枯草芽胞杆菌中的表达
《福建农业学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：[目的]探索嗜热α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGTase)在枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis RIK1285)中的高效胞外表达条件.[方法]以来源于枯草芽胞杆菌的173种信号肽为基础构建信号肽文库,筛选获得9条表达效率更高的信号肽,其中citH信号肽引导分泌效率最高.在此基础上,为进一步优化α-CGTase的分泌表达,对信号肽citH的Gly2、Asn3及Thr4进行饱和突变,并比较不同突变体的引导分泌效率.[结果]突变体G2R-N3K-T4L-CGT的引导分泌效率最高,重组枯草芽胞杆菌的胞外α-CGTase活力高达(14.2±0.11 )U·mL?1,相比未突变信号肽[(9.6±0.29 )U·mL?1],分泌效率提高了47.9%;是野生菌株嗜热地芽胞杆菌Geobacillus caldoxylosilyticus.CHB1(0.66 U·mL?1)的21.5倍.重组 α-CGTase的最适反应pH值为6.0,最适反应温度为60 ℃,在50 ℃以内稳定;Mg2+、Ca2+对α-环糊精酶活性具有一定的激活作用.[结论]信号肽对环糊精酶在芽胞杆菌中的高效表达具有重要影响,为外源蛋白在芽胞杆菌中的表达提供一定借鉴.
关键词： 信号肽 α-环糊精葡萄糖基转移酶 饱和突变 枯草芽胞杆菌
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