科研产出
粟弯孢霉叶斑病菌G蛋白β亚基基因克隆及表达
《华北农学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：旨在获得粟弯孢霉叶斑病菌G蛋白β亚基基因,明确其表达模式,为阐明该基因对粟弯孢霉叶斑病菌致病性的调控机制奠定基础。运用SMART RACE RT-PCR技术,克隆粟弯孢霉叶斑病菌G蛋白β亚基基因ClGβ全长cDNA序列,以qRT-PCR技术,对该基因在粟弯孢霉叶斑病菌不同生长时间的表达特征进行分析。结果表明,ClGβ基因cDNA编码区为1 056 bp,DNA包含4个内含子和5个外显子,编码351个氨基酸。该基因的cDNA序列在GenBank中注册的登录号为JQ768316。qRT-PCR结果表明,Gβ基因在菌株生长过程中表现出前期表达量较低而后期表达量明显升高的趋势。构建了pET28(a)-ClGβ原核表达载体,经IPTG诱导,目的蛋白在宿主菌E.coli BL21中获得表达,表达产物分子量与ClGβ蛋白计算分子量一致。
关键词： 粟弯孢病菌 G蛋白β亚基 qRT-PCR 原核表达
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二氢吡啶对中国荷斯坦牛表达的影响
《湖北畜牧兽医 》 2014
摘要：为研究二氢吡啶抗奶牛热应激的作用机理,以20头中国荷斯坦牛为材料,分别饲喂含0、100、150、200 mg/kg的二氢吡啶日粮,利用实时定量(qRT-PCR)技术对其外周血淋巴细胞HSP70基因mRNA的相对表达量进行检测。结果表明,日粮中添加二氢吡啶在高温热应激期可以显著提高中国荷斯坦牛的表达量,其中日粮中添加200 mg/kg组表达量最高,显著高于对照组和100/mg/kg添加组(p <0.01)。
关键词： HSP70基因 二氢吡啶 实时定量RT-PCR
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科研单位基层党组织要提升四种能力发挥四大作用
《现代农村科技 》 2014
摘要：本文阐述了科研单位基层党组织要提升四种能力,即:吃透政策、落实政策、把握方向的能力,做好群众工作的能力,改革创新能力,自身建设的能力。发挥的四大作用为:政治核心作用,凝聚力、向心力作用,服务引领作用,战斗堡垒和先锋模范作用。
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葡萄无核二倍体与四倍体杂交胚挽救及后代倍性分析
《河北农业大学学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为培育三倍体无核葡萄新品种,分别以二倍体无核葡萄品种‘Flame Seedless’、‘Sweet Scarlet’和‘无核白’为母本,以四倍体品种‘巨峰’为父本进行杂交,研究不同取样时期、不同萌发培养基和不同珠被处理方式对杂种胚成苗影响的研究,并通过流式细胞仪对杂种后代进行了三倍体类型初选。结果表明:不同时期剥取的胚珠在成苗率方面有显著差异,不同杂交组合适宜取材时期也不同,其中‘无核白’ב巨峰’为30d、‘Sweet Scarlet’ב巨峰’为35d、‘Flame Seedless’ב巨峰’为40d;在胚萌发阶段,接种在1/2MS+IAA 0.1mg/L培养基上有利促进胚萌发;直接剥取裸胚萌发较快,且能显著提高杂交胚的成苗率。经倍性分析,初步确定获得了三倍体杂种幼苗22株。
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cDNA文库在棉花基因发掘中的应用
《中国农业大学学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：构建cDNA文库是发掘基因和研究基因功能的重要工具,也是基因组学研究的重要技术手段。棉花作为世界上重要的经济作物之一,研究人员已经构建了大量的棉花cDNA文库,为棉花基因发掘和功能研究积累了丰富的Expressed Sequence Tags(ESTs)资源。本文对近几年来cDNA文库在棉花基因发掘中的应用进行了总结。
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培养基渗透压和生长调节剂对葡萄种质离体保存的效应
《分子植物育种 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：以葡萄品种Melissa、Sweet Scarlet、巨玫瑰、黑玫瑰组培苗为试验材料,在继代培养基中加入不同浓度的白砂糖、甘露醇提高渗透压或分别附加不同浓度的多效唑(PP333)、矮壮素(CCC)、脱落酸(ABA)等生长调节剂,研究其对葡萄组培苗离体保存延缓生长的影响,以探寻适宜葡萄离体种质保存期间延长继代间隔的方法。结果表明:培养基中附加20~30 g/L甘露醇或附加2~3mg/LPP333能有效抑制Melissa、巨玫瑰葡萄组培苗的生长,存活率高,可用于该葡萄品种种质离体保存。培养基中附加25~85g/L的白砂糖对Melissa、巨玫瑰葡萄组培苗未表现抑制生长作用;低于300mg/L的CCC对Melissa、Sweet Scarlet葡萄组培苗抑制生长作用不明显,高于400 mg/LCCC引起组培苗玻璃化。附加3 mg/L以上ABA对巨玫瑰、黑玫瑰葡萄组培苗抑制生长作用不明显,且引起组培苗死亡。CCC和ABA不适宜上述供试葡萄组培苗的缓慢生长法保存。
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分子印迹技术在线富集测定玉米中嗪草酮残留
《中国农学通报 》 2014 CSCD
摘要：为了对玉米中的嗪草酮残留进行高效的分离、富集和测定,以嗪草酮为模板分子,采用原位聚合法制备了分子印迹聚合物,并将印迹聚合物作为固相萃取柱用于玉米样品的前处理过程,建立了在线富集液相色谱法测定玉米中嗪草酮残留的分析方法。研究结果表明,嗪草酮印迹聚合物具有良好的亲和性和特异选择性,在0.01~0.50μg/m L质量浓度范围内有良好的线性关系(r=9991),最低检出浓度(S/N=3)为1.8×10-3μg/m L,在0.01、0.05、0.10 mg/kg 3个浓度的添加水平下,方法的平均回收率在80.9%~94.5%之间,相对标准偏差低于5.98%。方法简化了样品前处理步骤,提高了检测灵敏度,缩短了分析时间,无基质干扰,精密度和准确度高,可应用于玉米中嗪草酮残留的分析检测。
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黄萎病菌侵染下陆地棉Dirigent-like蛋白基因表达差异分析
《中国农业科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：目的发掘陆地棉Dirigent-like蛋白基因家族,明确不同黄萎病抗性品种间该基因家族成员的多态性及表达差异。方法利用Illumina Hiseq 2000测序平台,通过RNA-Seq测序技术,获得黄萎病菌侵染陆地棉抗病品种和感病品种的Dirigent-like蛋白基因家族成员Unigene序列;采用生物信息学软件对其进行核苷酸序列及编码蛋白的多重比对和系统进化分析;针对该家族成员设计特异的quantitative real-time PCR引物,在Applied Biosystems 7500 Real Time PCR System上使用SYBR green PCR试剂盒标记反应产物,棉花Gh ACTIN为内标,采用2-ΔΔCt法分析抗病品种冀79、感病品种TM-1中该基因家族成员在0 h及受侵染1、8、24、48、72和96 h后的表达差异。结果获得12个陆地棉Dirigent-like蛋白基因家族成员;该家族成员分属3个进化群,基因间存在4个保守结构域。其同源基因在D5基因组染色体上,主要集中于第2、3、6、7、9、10、13染色体。陆地棉受黄萎病侵染后,Dirigent-like蛋白基因抗病、感病品种间差异表达,抗病品种冀79受黄萎病菌侵染1 h时上调2倍以上的有Gh DIR4、Gh DIR6、Gh DIR7、Gh DIR9、Gh DIR10和Gh DIR11,其中,Gh DIR9上调6.5倍;侵染8 h时Gh DIR1、Gh DIR4、Gh DIR7和Gh DIR11上调,有2个上调2倍以上;侵染24 h时仅Gh DIR4上调2倍以上;侵染48 h时Gh DIR1、Gh DIR4、Gh DIR7和Gh DIR11上调达到2倍以上;侵染72 h时仅Gh DIR9上调2倍以上,达到6.4倍;侵染96 h时仅Gh DIR4上调2倍以上。感病品种TM-1受侵染1 h时仅Gh DIR7上调2倍以上;受侵染8 h时Gh DIR7上调325倍,Gh DIR10上调2倍以上;侵染24和48 h时Gh DIR4、Gh DIR5、Gh DIR6、Gh DIR7、Gh DIR9、Gh DIR10急剧上调,Gh DIR7、Gh DIR9、Gh DIR10上调10倍以上;受侵染72 h时Gh DIR4和Gh DIR7还保持较高的表达量;侵染96 h时Gh DIR5、Gh DIR6、Gh DIR7、Gh DIR9、Gh DIR10和Gh DIR11保持较高的表达量。由此看出,受黄萎病侵染时抗病种质冀79 Dirigent-like蛋白基因家族成员上调表达要早于感病品种,但是,该基因家族成员在感病品种受侵染8 h后上调倍数远远高于抗病品种,而且到96 h时其表达量还较高;抗病品种上调的Dirigent-like蛋白家族成员Gh DIR4、Gh DIR7、Gh DIR9和Gh DIR11值得关注;Gh DIR6、Gh DIR7、Gh DIR9和Gh DIR10在感病品种TM-1中上调显著。此外,抗病、感病品种间Gh DIR1、Gh DIR3、Gh DIR5、Gh DIR8、Gh DIR10和Gh DIR12存在核苷酸多态性。结论 Dirigent-like蛋白与黄萎病菌侵入后棉花植株的抗性反应相关。
关键词： 棉花 Dirigent-like蛋白基因 黄萎病菌 表达差异
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