科研产出
嗜冷杆菌EASTSEAG5-1415脂肪酶基因的克隆和序列测定
《高技术通讯 》 2005 EI 北大核心 CSCD
摘要：从东海深海底泥中筛选到一株产低温碱性脂肪酶的海洋细菌EASTSEAG5-1415,经鉴定为嗜冷杆菌PSYCHROBACTER GLACINCOLA.将其染色体DNA用SAU3AI部分酶切后,低熔点琼脂糖回收2~10KB 的DNA片段,用KLENOW大片段酶半补齐,与用SAL I酶切半补齐的质粒PUC19连接后,转化E.COLI.JM109构建基因文库.用平板测活法从基因文库初步筛选到两株产碱性脂肪酶的阳性克隆,采用ELISA反应进一步鉴定.序列测定分析表明,两个重组质粒中都包含长度为951BP的碱性脂肪酶基因的完整开放阅读框架(ORF)和上游基因调控序列.此片段编码有317个氨基酸组成的酶,计算分子量为35 000 DAL.通过SOUTHERN杂交证实了此片段来自于嗜冷杆菌PSYCHROBACTER GLACINCOLA EASTSEAG5-1415基因组.
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栉孔扇贝*虾夷扇贝子一代杂种优势的RAPD分析
《高技术通讯 》 2005 EI 北大核心 CSCD
摘要：应用RAPD技术对栉孔扇贝*虾夷扇贝子一代的杂种优势进行了研究,对栉孔扇贝(C)、虾夷扇贝(P)及其正交F1(C♀*P♂)、反交F1(P♀*C♂)共4个群体的RAPD扩增带谱进行了分析.从40个随机引物中筛选出16个扩增带丰富的引物进行扩增,共得到L15条清晰稳定的扩增带,扩增片段大小在200~2000BP之间,其中有82个扩增位点具有多态性,多态性位点比率为71.3%.栉孔扇贝与正反交子代的相对遗传距离分别为0.0852和0.2886;虾夷扇贝与正反交子代的相对遗传距离分别为0.2327和0.0559,杂种子代与两亲本的遗传差异不是对等的,而是偏向各自的母本,系统树、SHANNON多样性指数同样证明了这一点.两亲本群体内相似性指数分别为0.8392和0.8451,均大于正交子代的群体内相似性指数,而小于反交子代的群体内相似性指数,表明正交子代群体的遗传多样性水平升高,产生杂种优势;反交降低,未产生明显的杂种优势,与4个群体SHANNON遗传多样性指数计算分析结果一致.
关键词： 扇贝 栉孔扇贝 虾夷扇贝 杂交 杂种优势 RAPD
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利用AFLP技术分析中国明对虾的韩国南海种群和养殖群体的遗传差异
《高技术通讯 》 2005 EI 北大核心 CSCD
摘要：利用AFLP技术对新发现的中国明对虾的一个地理种群-韩国南海种群(SP)和中国明对虾的养殖群体(CP)进行了遗传分析.每个群体随机取样30个,5对AFLP引物获得326个位点.其中SP多态位点比例(P0.99)46.93%,SHANNON多样性指数(I)0.1884,NEI(1978)基因多样性指数(H)0.1197,群体差异性位点9个,占检测位点总数的2.7%.CP多态位点比例(P0.99)51.84%,SHANNON多样性指数(I)0.1954,NEI(1978)基因多样性指数(H)0.1229,群体差异性位点19个,占检测位点总数的5.8%.SP种群各项遗传参数都低于CP种群.两个群体的非偏差遗传相似度和遗传距离分别为0.9899和0.0102.利用中国明对虾的韩国南海种群和养殖群体杂交可以获得新的种质资源,这将为获得最大变异数量性状表型和基因多样性的产生提供可能.
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鲈鱼蛋白质感染因子蛋白基因的克隆和结构分析
《高技术通讯 》 2005 EI 北大核心 CSCD
摘要：采用RT-PCR方法分离了鲈鱼蛋白质感染因子蛋白编码基因序列,并进行了结构分析.研究证明,该感染因子蛋白由507个氨基酸组成,与红鳍东方、大西洋鲑蛋白质感染因子蛋白的平均相似性为67.9%,预测分子量约54KD,具有信号肽、短肽顺接重复、疏水区、糖基化位点、二硫键、糖基缩醛磷肌醇锚定位点等蛋白质感染因子蛋白的主要特征结构域.鲈鱼蛋白质感染因子蛋白编码基因序列的分离,为蛋白质感染因子的进化、功能研究以及可能存在的鱼类传染性海绵样脑病研究奠定了基础.
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西北太平洋巴特柔鱼渔场与环境因子关系研究
《高技术通讯 》 2004 EI 北大核心 CSCD
摘要：根据美国NASA提供的卫星遥感反演获取的海表温度、海水叶绿素及海面高度三级数据产品和我国在西北太平洋的巴特柔鱼生产统计资料,统计分析了该海域巴特柔鱼资源同海表温度、海水叶绿素浓度及海面高度之间的相关关系.结果显示:柔鱼的适温范围大致为10~22℃,最适温度为15~17℃.柔鱼渔场叶绿素浓度大致为0.1~0.6MG/M3,叶绿素浓度处于0.12~0.14MG/M3之间时,渔场出现频次最高.形成渔场海域的海面高度多高于平均海面高度(SSH>0).广义加性模型计算表明:柔鱼在每年6~8月的北上索饵洄游和10~11月的南下过程中同环境要素的关系表现出不同的特征.SST同柔鱼产量的关系在北上洄游时多为正相关,南下时为负相关.6~10月份叶绿素浓度同渔获产量为负相关,11月份其相关性较小.渔获产量整体上随经度变化无显著变化,相关性较低,渔获产量与纬度的关系密切,相关性好.
关键词： 西北太平洋 巴特柔鱼 广义加性模型 海表温度 叶绿素
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检测对虾白斑综合症病毒(WSSV)与宿主细胞结合的荧光素标记法
《高技术通讯 》 2004 EI 北大核心 CSCD
摘要：采用蔗糖梯度离心方法提取对虾的白斑综合症病毒(WSSV),用荧光素对病毒进行标记.标记的病毒同原代培养的日本对虾组织细胞进行结合试验.在4℃结合1H,洗板去除未结合的病毒成分后,在荧光显微镜下可观察到培养的血细胞和鳃细胞带有绿色荧光,而肌肉细胞和卵巢细胞没有荧光产生,荧光的产生说明病毒与细胞已经结合.该方法与过去所用的方法相比,具有操作简便、快速、直观、消耗试剂少、比较经济等优点,可成为研究白斑综合症病毒和细胞结合的一种新方法.
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肽聚糖制剂对日本对虾非特异免疫因子的作用
《高技术通讯 》 2004 EI 北大核心 CSCD
摘要：用含不同浓度肽聚糖制剂的饵料投喂日本对虾,养殖30D后取对虾血淋巴,分析血清中溶菌活力、凝集活力、酚氧化酶活力、超氧化物歧化酶活力、溶血活力.结果显示:添加肽聚糖饵料组对虾比对照组对虾血清中的酚氧化酶活力、凝集活力均显著提高(P<0.05),高浓度肽聚糖饵料组(1*10-3)对虾血清溶血活力显著高于低浓度组及对照组中对虾的溶血活力(P<0.05);试验组与对照组中对虾的溶菌活力、总超氧化物歧化酶活力差异不明显(P>0.05).表明饵料中使用一定浓度的肽聚糖可以通过提高对虾血清中酚氧化酶等因子活力而达到提高非特异免疫力的目的.
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RAPD标记在中国对虾FENNEROPENAEUS CHINENSIS单对交配亲本及其子一代的分离方式
《高技术通讯 》 2004 EI 北大核心 CSCD
摘要：利用RAPD标记对中国对虾单对交配亲本及其子一代(全同胞家系)的分离方式进行了研究.100个RAPD随机引物扩增结果的统计分析表明,标记在F1代的分离方式可归为3类,即符合孟德尔遗传比例、偏离孟德尔遗传比例和异常分离.符合孟德尔遗传的情况又包括:不分离,亲本均有而在子代不分离的标记(代表了亲本基因型的3种组合:AA*AA、AA*AA、A A*AA)和亲本中呈多态而在子代中不分离的标记 (代表了亲本基因型的 2种组合:AA*AA、A A*AA);亲本中呈多态而在子代中1∶1分离 (代表了亲本基因型的2种组合:AA*AA、AA*A A );亲本均有而在子代中3∶1分离 (代表了亲本基因型的 1种组合:AA*AA).偏分离的标记包括,亲本中呈多态而在子代中偏离1∶1分离的标记和亲本均有而在子代中偏离3∶1分离的标记 .异常分离的标记为在F1代出现双亲均不具备的标记.3种分离位点出现的频率分别为 89. 3%, 7.4%和2.8%.其中呈1∶1和3∶1孟德尔分离规律的位点占分离位点总数的69.5%.母本特有标记和父本特有标记中符合孟德尔分离(1∶1)分别占分离位点总数的27.8%和19.5%.本研究结果证明RAPD标记结合"双假测交构想"构建中国对虾遗传连锁图谱的可行性.
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花鲈肿瘤坏死因子基因及其在LPS和病毒刺激下表达的研究
《高技术通讯 》 2004 EI 北大核心 CSCD
摘要：采用同源克隆和锚定PCR技术,从花鲈(LATEOLABRAX JAPONICUS)中克隆到肿瘤坏死因子α(TUMOR NECROSIS FACTOR α,TNFα)CDNA的全序列.花鲈TNFα的CDNA全长990 BP,3′非编码区域(UTR)为192 BP,5′UTR为72 BP,开放阅读框(ORF)为723 BP,可编码241个氨基酸,分子量大约为26KDA.同源性分析表明该序列与其他鱼类甚至哺乳动物的TNFα基因具有很高的相似性,并含有TNF家族的签名序列(SIGNATURE).同时,利用RT-PCR技术,对不同刺激下该基因在鱼体内的表达情况进行了初步研究,发现TNFα基因在未受刺激鱼体的头肾和脾脏中有明显的表达.脂多糖(LIPOPOLYSACCHARIDE,LPS)和虹彩病毒(IRIDOVIRUS)都可以诱导TNFα基因高水平的表达,但是在不同组织内的表达存在差异.LPS刺激后表达较强的组织是头肾和脾脏,而病毒感染后TNFα在肝脏中的表达较强.研究结果表明花鲈TNFα基因存在组成型和诱导型两种表达调控机制,在抵御病原感染过程中发挥重要作用.
关键词： 花鲈 肿瘤坏死因子(TNFα) 基因克隆 MRNA表达
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鲮生长激素CDNA的克隆及其重组表达产物的促生长活性
《高技术通讯 》 2004 EI 北大核心 CSCD
摘要：利用RT-PCR技术从鲮脑垂体组织中克隆出生长激素CDNA 片段,克隆的MCGH全长567BP,编码由188个氨基酸残基组成的GH成熟肽.构建了表达载体PQE30-MCGH,转化大肠杆菌M15(PREP4),在初步优化发酵条件的基础上实现了鲮MCGH在大肠杆菌中的高效表达,表达的重组蛋白占菌体总蛋白的32.13%,经WESTERN BLOTTING分析证实所表达的重组蛋白是MCGH.表达产物主要以包涵体的形式存在.重组蛋白变性、复性后,经NI-CHELATING SEPHAROSE亲和层析纯化,SDS-PAGE显示,纯化的MCGH纯度约为94%.纯化的MCGH腹腔注射莫桑比克罗非鱼(OREOCHROMIS MOSSAMBICUS),经4周处理后,实验组1和2的体长增长率分别比对照组快9.38%和9.75%,体重增长率分别快23.42%和62.48%.经T检验统计分析表明,表达的重组MCGH具有显著的促罗非鱼生长作用(P＜0.05).
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