科研产出
牙鲆自然杀伤细胞增强因子(NKEF)全长CDNA的克隆及表达分析
《高技术通讯 》 2005 EI 北大核心 CSCD
摘要：采用快速扩增CDNA末端(RAPID AMPLIFICATION OF CDNA ENDS,RACE)的方法,分离和测定了牙鲆自然杀伤细胞增强因子(NKEF)CDNA的全长核苷酸序列,5''RACE扩增分离得到了400BP左右的片段,3''RACE扩增得到了800BP左右的片段,经过拼接得到了牙鲆NKEF全长CDNA序列.牙鲆NKEF CDNA全长1028BP(不包含POLYA),其中包括67BP的5''非翻译区、597BP的开放阅读框和364BP的3''非翻译区(不包含POLYA),整个开放阅读框编码198个氨基酸.RT-PCR分析表明,NKEF基因在牙鲆不同组织中普遍表达,但是表达水平存在着明显的差异.研究结果为提高牙鲆自身免疫防御能力的研究提供了理论依据.
关键词： 牙鲆 自然杀伤细胞增强因子 快速扩增 CDNA 末端 CDNA
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牙鲆胚胎玻璃化冷冻技术研究
《高技术通讯 》 2005 EI 北大核心 CSCD
摘要：对名优经济鱼类牙鲆(PARALICHTHYS OLIVACEUS)胚胎的玻璃化冷冻技术方法进行了研究.筛选出了适合于牙鲆胚胎平衡和培养的基础液BS2,对牙鲆不同时期胚胎在玻璃化液VS2中的耐受能力进行了研究,随着平衡时间的延长,胚胎成活率逐渐降低,4-5对肌节期、16-20对肌节期、尾芽期表现出对玻璃化液较强的适应能力.对洗脱液的种类和浓度进行了筛选,结果显示0.125MOL/L蔗糖洗脱成活率最高.在室温(21~22℃)和6℃下分别对牙鲆不同时期胚胎在VS1中的成活率进行了比较研究,结果显示出15-20对肌节期在室温下的成活率高于低温,其它时期胚胎低温下的成活率高于室温.利用VS4、VS2、VS3分别对牙鲆尾芽期、肌效应期、出膜前期胚胎进行玻璃化冷冻保存,取得了5粒成活胚,4粒孵化出膜,成活时间为14~67H.
关键词： 牙鲆(PARALICHTHYS OLIVACEUS),胚胎,玻璃化,冷冻保存
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大菱鲆红体病虹彩病毒ATPASE基因的克隆与序列分析
《高技术通讯 》 2005 EI 北大核心 CSCD
摘要：克隆了大菱鲆红体病虹彩病毒(TRBIV)的重要功能蛋白-腺苷三磷酸酶(ADENOSINE TRIPHOSPHATEASE, ATPASE)基因的全部编码区及其上下游部分的核苷酸序列.经多序列比对和分析发现,TRBIV与GENBANK中6种代表性虹彩病毒的同源性介于35%~98%之间.绘制出的包含TRBIV在内的14种虹彩病毒的系统发育树证实,TRBIV是一种新的鱼类虹彩病毒,其分类地位处在虹彩病毒科待指定病毒属内的真鲷虹彩病毒亚群和传染性脾肾坏死病毒亚群之间.
关键词： 大菱鲆 病毒病 大菱鲆红体病虹彩病毒 腺苷三磷酸酶
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WSSV-VAP1基因克隆及在毕赤酵母中的表达
《高技术通讯 》 2005 EI 北大核心 CSCD
摘要：根据 WSSV-黏附蛋白(VAP1)基因序列设计了一对引物,在5''引物和3''引物中分别引入ECORI和XBAI酶切位点.经PCR扩增,将VAP1基因克隆至穿梭载体PGAPZαA之GAP启动子下游位点,构建成含α-FACTOR信号肽的重组表达载体,获得的重组质粒PGAPZαA-VAP1经线性化后转入毕赤氏酵母SMD1168菌株,构建成分泌型表达VAP1的酵母工程菌株.SDS-PAGE和WESTERN-BLOT及结合活性检测分析表明,VAP1基因在该体系中得到成功表达,表达产物与对虾细胞膜具明显的结合活性.
关键词： WSSV-VAP1 基因 克隆 毕赤酵母 分泌表达
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低温工厂化养殖水体氨氮处理微生物的初步研究
《农业工程学报 》 2005 EI 北大核心 CSCD
摘要：为了研究低温环境下工厂化养殖水体氨氮处理微生物,用平板菌落计数法和最大几率数法对处理养殖水体的生物滤池中的微生物数量进行了跟踪检测,同时测定实验组和对照组养殖水体的理化性质。结果显示在实验过程中,硝化细菌和亚硝化细菌的数量持续上升,后期达到稳定;初期系统中没有反硝化细菌,后期数量开始逐渐增加。实验组与对照组的养殖水体的氨氮、硝酸盐和亚硝酸盐浓度的测定结果证明了生物滤池中的硝化——反硝化系统在发挥作用。实验表明经过低温环境的驯化和诱导,在12℃的低温条件下,微生物处理仍然是工厂化养殖水体中氨氮的有效处理手段。实验验证了在冷水鱼工厂化低温养殖中使用生物滤池处理氨氮的可行性。
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A3α-肽聚糖对凡纳滨对虾生长、免疫机能和抗病毒感染的影响
《高技术通讯 》 2005 EI 北大核心 CSCD
摘要：通过实验考察了A3α-肽聚糖(PG)制剂对养成期凡纳滨对虾的生长、免疫机能及抗白斑综合征病毒(WSSV)感染能力的影响.设立了连续投喂、间隔投喂和浸浴等6个实验组,分别在30 D、60D和90D时,测定对虾的体长、体重、免疫机能和对虾的抗WSSV感染力.结果表明:30D时,连续投喂组对虾的体长和浸浴组及0.05%、0.1%PG连续投喂组对虾的体重较对照组有显著增长(P＜0.05);0.05%、0.1%PG连续投喂组对虾体内的PO活性较对照组有显著提高(P＜0.05);60D时,浸浴组及0.05%、0.1%PG连续投喂组对虾的体长、体重较对照组均有极显著增长(P＜0.01),浸浴组、0.1%PG连续投喂组对虾血细胞吞噬活性显著增强(P＜0.05),浸浴组及0.05%、0.1%PG连续投喂组对虾血浆上清液PO活性均有显著提高(P＜0.05);90D时,浸浴组对虾的体长、体重较对照组均有极显著增长(P＜0.01),间隔投喂组对虾血细胞吞噬活性显著增强(P＜0.05),间隔投喂组血浆中的PO活性显著增高(P＜0.05).各期感染实验均证明PG能增强对虾对WSSV的抗感染能力.
关键词： 肽聚糖 凡纳滨对虾 生长 免疫性 白斑综合征病毒(WSSV) 感染
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大菱鲆病原鳗弧菌生物学及分子特征研究
《高技术通讯 》 2005 EI 北大核心 CSCD
摘要：从山东沿海养殖发病大菱鲆分离了5株鳗弧菌.5株菌对大菱鲆有较强的致病性,LD50范围为2.32*101~4.03*102 CFU/G鱼;5株菌分别属于O1、O2、O3血清型,菌株之间的16SRRNA基因序列相似性范围97.1%~99.9%;与国外报道的鳗弧菌的序列相似性范围为89.7%~99.9%.5株菌的生理生化特征与鳗弧菌标准菌株一致,能产生多种胞外酶和溶血素;都含有金属蛋白酶基因和溶血素基因,其中3株菌各含有一个67KB大质粒.病原菌对青霉素、苯唑青霉素、氨苄青霉素、先锋霉素Ⅳ、先锋霉素Ⅴ、先锋霉素Ⅵ、链霉素、强力霉素、洁霉素、万古霉素、灭滴灵等11种常用抗菌药物有抗性,只对新生霉素、呋喃妥因、利福平、新霉素等4种药物敏感.
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鳗弧菌溶血素基因的克隆及突变株的构建
《高技术通讯 》 2005 EI 北大核心 CSCD
摘要：PCR扩增出鳗弧菌M3溶血素基因的保守区序列,根据保守区序列设计引物,利用反向PCR和巢式PCR 扩增出溶血素基因的部分序列,结合构建的鳗弧菌M3的基因组文库,克隆出溶血素基因的全长序列.根据基因推测的氨基酸编码序列与已发表的血清型为A的鳗弧菌PT84057有86%的相似性.用自杀质粒对鳗弧菌M3染色体上的溶血素基因进行了插入突变, 将突变株对金鱼进行肌肉注射,结果发现,突变株的毒力没有发生显著的变化,证明所克隆的溶血素基因对鳗弧菌M3的毒力没有直接的贡献.
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近江牡蛎16S RRNA基因片段序列变异分析
《高技术通讯 》 2005 EI 北大核心 CSCD
摘要：采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增了近江牡蛎CRASSOSTREA RIVULARIS (GOULD)线粒体DNA16S RRNA基因,获得了大约为500BP的片段.PCR产物纯化后进行序列测定,经CLUSTAL X同源排序,去除引物及部分端部序列,得到了415BP的核苷酸片段.比较并分析了该片段的钦洲湾、长沙湾、镇海湾和珠江口共105个近江牡蛎个体的核苷酸序列多态性,共检测到23个多态性核苷酸突变位点,包括16个转换位点和7个颠换位点,发现了1个核苷酸插入突变位点.4个群体可分为12种单倍型.结果表明:4个群体中广西钦洲湾群体遗传多样性最高,其次为长沙湾、珠江口群体,镇海湾群体最低.
关键词： 近江牡蛎,线粒体DNA,16S RRNA基因,遗传多样性
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肽聚糖制剂提高凡纳对虾抗白斑综合征病毒感染力的研究
《高技术通讯 》 2005 EI 北大核心 CSCD
摘要：将肽聚糖制剂添加到普通对虾饲料中,制成分别含肽聚糖制剂1%和0.1%的免疫饲料,按常规方法投喂凡纳对虾.4周后测定每个实验组对虾的酚氧化酶、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性,同时进行白斑综合征病毒(WSSV)的人工投喂感染实验.实验结果显示,感染实验前投喂普通饲料组对虾和投喂免疫饲料组对虾的酚氧化酶和酸性磷酸酶活性无显著差别(P>0.05),各实验组对虾碱性磷酸酶活性的差异显著(P<0.05);感染实验后各实验组存活对虾的各项免疫酶活性无显著差异(P>0.05).凡纳对虾摄食添加了肽聚糖制剂的免疫饲料后,明显提高了对虾抵御WSSV感染的能力,其中尤其以添加了1%肽聚糖制剂的实验组的抗病毒感染能力最强,到实验结束时累计死亡率只有10%,而对照组为75%;1%添加量组与0.1%添加量组及对照组之间的累积死亡率差异显著(P<0.05).实验结果提示:在对虾饲料中添加肽聚糖可提高对虾抗病毒感染能力,从而达到防病治病、增加生产收益的目的.
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