基于线粒体COI基因的部分鲇形目鱼类系统发育研究

陈海港; 朱新平; 李伟; 刘毅辉; 赵建; 叶朝阳; 公月月; 《中国水产科学 》 2018 北大核心 CSCD

摘要：本文选择COI基因片段作为分子标记,对部分鲇形目鱼类(Siluriformes)进行系统发育研究。应用通用引物PCR扩增得到13种鲇形目鱼类的134条COI基因,并与Gen Bank中获得15种鲇形目鱼类的51条COI基因进行比对分析。结果显示:鲇形目鱼类COΙ基因存在碱基插入缺失现象较少,为越南隐鳍鲇(Pterocryptis cochinchinensis)、丝尾鳠(Hemibagrus wyckioides)和黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)3种共计5个位点;平均碱基含量A+T(55.5%)显著高于G+C(44.5%)。利用Kimura’s 2-parameter计算28个物种的种间平均遗传距离为0.195,23个物种的种内平均遗传距离为0.006。系统发育树的分析结果表明,Neighbour-Joining(NJ)树较Maximum Likelihood(ML)树更为适合鲇形目鱼类的遗传发育分析;COI基因在科及其以下水平的系统进化关系与传统分类方法所认同的结果一致性较高,达到82.9%以上;在目水平的一致性的可信度较低,仅为71%;半鲿属聚为单系类群,黄颡鱼属、属和拟鲿属三者聚为一支,黄颡鱼属与拟鲿属的亲缘关系较近。

关键词： 鲇形目 线粒体COI基因 系统发育

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虹鳟免疫诱导型基因Cathelicidin2启动子功能分析

赵紫霞; 许建; 江炎亮; 白庆利; 蒋立坤; 陈葆华; 徐鹏; 《渔业科学进展 》 2018 北大核心 CSCD

摘要：本研究通过实时荧光定量PCR实验对虹鳟(Oncorhynchus mykiss)Cathelicidin2(Cath2)基因的转录模式进行了分析。结果显示,该基因在鳃、头肾等与机体免疫防御功能密切相关的组织内转录,在细菌和病毒感染后,转录水平均显著升高。对基因上游调控序列进行启动子和转录因子结合位点预测,发现该启动子具有真核生物典型的TATA盒和CAAT盒结构,基因上游直至第一内含子区域内,密集存在多个免疫相关转录因子结合位点,其中,2个核因子κB(Nuclear factor kappa B,NFκB)预测结合位点均位于核心启动子正链区域。在草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肾组织细胞系内,绿色荧光蛋白和萤火虫荧光素酶基因都能够在该启动子驱动下表达,表明其具有启动子活性,且启动子活性在受到免疫诱导后增强,包括细菌脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)模拟的细菌感染和聚肌胞苷酸(Polyinosinic polycytidylic acid,Poly I:C)模拟的病毒感染。双荧光素酶报告基因检测显示,启动子活性在与NFκB转录因子表达时,增强至4.39倍,证明Cath2基因受NFκB通路调控。研究表明,虹鳟Cath2基因能够在多种免疫刺激诱导下表达,其启动子可以应用为免疫诱导型的基因工程元件,驱动外源免疫基因在鱼体内适时表达,抵御外界病原感染,同时,避免非必要条件下的过度表达形成生长负担。

关键词： 虹鳟 抗菌肽 Cathelicidin2 启动子 转录调控

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云纹石斑鱼、鞍带石斑鱼及杂交“云龙斑”肌肉营养成分分析及品质评价

王林娜; 田永胜; 唐江; 李振通; 成美玲; 马文辉; 毛东亮; 林好蔚; 翟介明; 《水产学报 》 2018 北大核心 CSCD

摘要：对云纹石斑鱼、鞍带石斑鱼及杂交"云龙斑"肌肉营养成分进行分析和品质评价,为其种质营养学鉴定及配合饲料的研制提供基础数据资料。采用常规方法,依据国家标准,对3种石斑鱼肌肉中的水分、蛋白、粗脂肪、灰分含量以及氨基酸、脂肪酸和10种矿物元素的组成与含量进行了测定和评价。云纹石斑鱼、鞍带石斑鱼及杂交"云龙斑"石斑鱼肌肉中粗蛋白含量分别为19.6%、18.4%和19.4%;3种石斑鱼氨基酸总量、必需氨基酸总量、必需氨基酸指数、鲜味氨基酸总量分别为(15.54%、14.72%、15.99%)、(6.86%、6.41%、7.04%)、(75.19、74.93、77.96)和(5.57%、5.3%、5.73%)。3种石斑鱼肌肉中粗脂肪含量分别为4.2%、10.1%和4.5%,脂肪酸种类丰富,并且含有大量的多不饱和脂肪酸,其比例符合理想脂肪酸的标准。3种石斑鱼肌肉中矿物元素种类丰富,5种常量元素K、Ca、Na、Mg、P和5种微量元素Fe、Mn、Cu、Zn、Se均有检出,其中杂交"云龙斑"的Na、K、Cu含量略高,另外几种矿物元素含量居于父母本之间。研究表明,云纹石斑鱼、鞍带石斑鱼及杂交"云龙斑"氨基酸种类齐全、比例适宜,人体必需氨基酸含量较高,是优质的蛋白源,同时含有大量的不饱和脂肪酸,且矿物元素种类齐全,是具有较高食用价值的优良海水养殖品种。其中杂交"云龙斑"在一些营养指标中明显高于其父母本,显现出一定的杂交优势。

关键词： 云纹石斑鱼 鞍带石斑鱼 杂交“云龙斑” 肌肉 营养成分 评价

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Tgf2转座子介导的草鱼、团头鲂和鲫插入诱变研究

孙成飞; 邹曙明; 陈杰; 蒋霞云; 《农业生物技术学报 》 2018 北大核心 CSCD

摘要：转座子介导的插入诱变(insertional mutagenesis)策略在养殖鱼类功能基因发掘和解释方面有着重要的研究意义。本研究以高效Tgf2转座子为研究基础,构建了pTgf2-β-actin-eGFP、pTgf2-EF1α-eGFP、pTgf2-Myo D-eGFP和pTgf2-Krt8-eGFP这4种带有不同启动子的供体质粒,以及pCS2-gf TP这种gf TP转座酶mRNA的体外表达的辅助质粒。将供体质粒和gf TP转座酶mRNA一起注射到草鱼(Ctenopharyngodon idellus)、团头鲂(Megalobrama amblycephala)和鲫(Carassius auratus)的1~2细胞期受精卵中,经对子代增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)整合率的检测和筛选,初步构建了1个以转座子为工具介导的插入诱变库。实验表明,在早期胚胎中,鲫和团头鲂的荧光率达到90%,在草鱼中则高达95%,随着供体质粒注射的改变,表现出肌肉、表皮及全身不同的绿色荧光发光特征。eGFP基因平均整合率在3种鱼类子代平游期的为50%~53%,在1龄阶段为33.0%~36.1%。在3种鱼类中得到插入诱变突变体,获得草鱼阳性个体162尾,其中有45尾表型明显差异;鲫阳性个体60尾,其中有14尾表型明显差异;团头鲂阳性个体51尾,其中有10尾表型明显差异。结果表明,通过插入Tgf2转座子,可在草鱼、团头鲂和鲫等鲤科鱼类中实现基因组的插入诱变,本研究结果可为目标性状功能基因的挖掘和功能机制研究积累一定的基础。

关键词： 草鱼 团头鲂 鲫 Tgf2转座子 插入诱变

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pH对青蛤的钙化率和两种酶活性的影响

蔡娟; 周凯; 盛文权; 隋延鸣; 来琦芳; 陆建学; 么宗利; 高鹏程; 《海洋渔业 》 2018 北大核心 CSCD

摘要：pH是影响水生动物的重要环境因子,pH的改变会引起水生动物一系列的生理应答。青蛤(Cyclina sinensis)是我国重要的养殖贝类,其在养殖过程中面临各种pH挑战。为了解青蛤在不同pH下的生理应答,实验设置了5个pH梯度:7.4、7.8、8.2、8.6、9.0,进行了7 d不同pH暴露。结果发现,经过7 d pH暴露,pH7.8组钙化率仅稍微降低,而pH 7.4、pH 8.6、pH 9.0组钙化率变为负值;pH 7.8、pH 8.2、pH 8.6组中各组织CA酶活性在整个实验期间保持稳定,pH 7.4、pH 9.0两组暴露3 h后CA酶活性开始升高并在24 h达到峰值,然后开始下降至120 h恢复至初始水平后保持稳定;与CA酶类似,pH 7.8、pH 8.2、pH 8.6组中各组织SOD酶活性在整个实验期间保持稳定,pH 7.4、pH 9.0两组从暴露12 h后开始升高并在24 h达到峰值,然后开始下降至48 h恢复至初始水平后保持稳定。结果表明,青蛤可以承受较大的pH波动,推测酸碱环境因素变化可能使青蛤产生生理应激效应,导致SOD和CA短期波动,但最后通过其自身调节可以恢复到初始状态。

关键词： 青蛤 pH 钙化率 SOD酶活性 CA酶活性

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中国明对虾NHE3基因克隆及其在pH胁迫下的表达

李政道; 李健; 葛倩倩; 王佳佳; 何玉英; 王培春; 《中国水产科学 》 2018 北大核心 CSCD

摘要：为研究钠/氢交换体(Na+/H+-exchanger,NHE)在中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)响应pH胁迫过程中发挥的作用,首先采用静水毒性实验方法确定了中国明对虾酸碱半致死pH,然后利用RACE技术克隆了中国明对虾Na+/H+-exchanger isoform 3(命名为FcNHE3)基因,并通过荧光定量PCR及RNA干扰技术分析了其在pH胁迫下的表达特征及功能。结果显示,72 h酸性半致死pH和碱性半致死pH分别为5.2和9.1。克隆获得FcNHE3基因(Gen Bank:MF373587)cDNA序列全长3508 bp,开放阅读框2805 bp,编码934个氨基酸,具有信号肽和12个跨膜结构域;蛋白同源分析发现,FcNHE3与青蟹(Carcinus maenas)同源性最高,达到74%;系统进化分析显示,FcNHE3与三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)和青蟹亲缘关系最近。荧光定量PCR分析表明,FcNHE3基因在鳃组织中表达量显著高于其他组织(P<0.05);酸性半致死pH(pH 5.2)胁迫下,FcNHE3基因在整个胁迫过程中显著上调表达(P<0.05);碱性半致死pH(pH 9.1)胁迫下,FcNHE3基因在前48 h显著下调表达(P<0.05),12 h表达量最低,仅在72 h出现上调表达。RNA干扰后,FcNHE3基因表达受到抑制,pH 5.2胁迫下对虾存活率相比对照组显著下降。研究表明相较于高pH胁迫,FcNHE3基因在中国明对虾响应低pH胁迫过程中可能发挥更重要的调节作用。

关键词： 中国明对虾 钠/氢交换体(NHE) 基因克隆 pH胁迫 RNA干扰

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青虾养殖投喂技术及抗应激管理

周群兰; 刘波; 孙存鑫; 《科学养鱼 》 2018

摘要：青虾学名日本沼虾,又名河虾,在分类学上属于节肢动物门、甲壳纲、十足目、游泳虾亚目、长臂虾科、沼虾属。青虾营养丰富、味道鲜美,蛋白质含量为18.42%,脂肪含量为1.3%,还含有丰富的钙、磷、铁和维生素等,深受广大消费者的欢迎。随着青虾新品种"太湖一号"的推广应用,青虾已成为江苏及附近地区主要养殖品种之一。与其他甲壳类动物一样,青虾对氧气的

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分离卸荷式板桩码头数值模拟与分析

王娜; 巫飞; 《工程建设与设计 》 2018

摘要：利用有限元软件对分离卸荷式板桩码头结构形式进行数值模拟.结果表明,荷承台的设置对分离卸荷式板桩码头影响较大,可为工程实际提供一定的依据.

关键词： 分离卸荷式板桩码头 有限元 影响因素

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罗非鱼供给侧结构改革的思考

袁媛; 袁永明; 代云云; 龚赟翀; 《中国农学通报 》 2018

摘要：为提高罗非鱼养殖的三大效益,总结了罗非鱼产业供给侧存在的突出问题如供需失衡、生产成本持续上涨、市场结构单一、抗风险能力小等,分析其成因包括中国罗非鱼主要依赖出口市场,出口消费不景气、加工厂盲目扩大产能、产品附加值低等。笔者从罗非鱼苗种生产、成鱼养殖,产品加工和出口贸易4个产业主要环节概述了中国罗非鱼产业生产现状,提出了罗非鱼供给侧结构改革的技术经济与政策路径,即通过推广健康养殖模式、加强加工产品关键配套技术研发、加大产品质量安全检测力度、开拓国内市场和大力发展产业化经营组织等措施,以促进罗非鱼产业的健康可持续发展。

关键词： 罗非鱼 供给侧 改革

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盐度骤变和渐变对南极大磷虾生存状况和蜕壳的影响

赵国庆; 邱盛尧; 黄洪亮; 李灵智; 屈泰春; 《海洋渔业 》 2018 北大核心 CSCD

摘要：为探讨南极大磷虾(Euphausia superb Dana)对盐度的适应性,设置盐度骤变和渐变两组实验。骤变实验以34±0.4为基础盐度,活体磷虾直接转入14±0.4、18±0.4、22±0.4、26±0.4、30±0.4、34±0.4、38±0.4、42±0.4、46±0.4、50±0.4和54±0.4盐度水体中;渐变实验盐度从34±0.4开始,以4·d-1的日变幅逐渐升至54和降至14,观察记录并分析不同处理下南极大磷虾的生存状态和蜕壳状况。实验结果表明:在骤变实验中,盐度对南极大磷虾死亡率的影响具有显著作用(P<0.05);蜕壳现象只出现在骤变盐度26~42范围时,且以盐度值为38时达到最大值,为88%。在渐变实验中,盐度对南极大磷虾的存活率的影响具有显著作用(P<0.05);南极大磷虾存活的适宜盐度为30~42;以34±0.4为基础盐度,盐度在特定范围内升高时,会增强南极大磷虾的蜕壳率,而随着盐度的下降,蜕壳率会逐渐降低。

关键词： 南极大磷虾 盐度 生存状况 蜕壳

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