信号肽对猪瘟病毒E2蛋白在杆状病毒表达系统中分泌表达的影响

文献类型： 中文期刊

第一作者： 魏蔷

作者： 魏蔷;刘运超;白怡霖;冯华;宋亚鹏;张改平

作者机构：

关键词： 信号肽;E2蛋白;猪瘟病毒(CSFV);分泌表达

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2020 年 01 期

页码： 120-127

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在通过引入信号肽序列实现猪瘟病毒E2蛋白在杆状病毒表达系统中的高效表达。首先将内源信号肽(简称endo)、蜂素信号肽(简称mel)及gp67信号肽(简称gp67)分别引入pFastBac1载体,随后插入E2基因,构建重组质粒。随后将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选得到重组黏粒,将重组黏粒转染sf21细胞以得到杆状病毒。经扩增后大量感染细胞,检测E2蛋白表达情况,利用镍填料纯化得到E2蛋白,并进行蛋白糖基化水平鉴定及蛋白免疫原性分析。PCR鉴定结果显示成功构建了重组质粒。挑选白斑进行PCR鉴定,证实得到重组黏粒。Western blot检测结果表明,E2蛋白实现了分泌表达,进一步比较细胞培养上清中E2蛋白的表达水平,确定gp67信号肽介导的E2蛋白分泌表达量最高。经镍填料纯化得到E2蛋白,SDS-PAGE结果显示其纯度较高,产率为25 mg·L~(-1)。通过ELISA分析其抗原性,结果表明纯化所得E2蛋白能特异性识别猪瘟阳性血清中的抗体,其抗原性良好。将纯化后的E2蛋白添加ISA201佐剂乳化后免疫BALB/c小鼠,阻断ELISA结果显示,免疫后14 d即产生较高水平的猪瘟特异性抗体,表明E2蛋白免疫原性良好。本研究为E2亚单位疫苗的研制奠定了基础。

分类号： S852.651

  • 相关文献

[1]苏云金芽胞杆菌分泌蛋白的鉴定及分析. 陈海波,宋福平,郭淑元. 2017

[2]台州地区规模猪场主要疫病的流行病学调查. 徐丽华,陈冬祥,姚邦,候贤宏,游新根,管妙东,王一成. 2017

[3]猪瘟病毒C株兔脾毒在SK6细胞中的增殖培养及其鉴定. 张淼涛,冯霞,刘湘涛,张彦明,谢庆阁. 2004

[4]猪瘟病毒p80基因NTPase/RNA解旋酶功能区在E.coli中的表达. 庄淑珍,刘湘涛,韩雪清,张彦明,张永国,薛青红,冯卫权,谢庆阁. 2003

[5]猪瘟病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立. 郑新添,黄其春,黄翠琴,吴玲,卢荣彬. 2015

[6]猪瘟病毒E2蛋白B细胞识别基序的筛选. 王爱萍,马丽平,李姣,邓瑞广,邢广绪,郝慧芳. 2008

[7]猪源牛病毒性腹泻病毒SD0803株E2蛋白的表达及抗体制备. 邓宇,蔺涛,孙春清,张宏彪,张荣,龙进学,黄律,文心田,曹三杰,童光志,袁世山,郑浩. 2012

[8]抗猪瘟病毒中和性单克隆抗体的制备与鉴定. 刘运超,陈玉梅,冯丽丽,汪磊,王聚财,陆东峰,张改平. 2019

[9]猪瘟病毒E2蛋白与猪RACK1相互作用的鉴定. 凌理军,李素,董泓,贺番,冯烁,廖亚金,申梁,孙元,翁长江,仇华吉. 2012

[10]猪瘟病毒E2蛋白酵母表达及其免疫活性研究. 周稳,金前跃,陈晓,丁培阳,李旭峰,王垚,柴永笑,张雨航,周恩民,郭军庆,郅玉宝,张改平. 2020

[11]猪瘟病毒E_2蛋白在酵母中分泌表达条件的优化. 韩雪清,刘湘涛,任芳丽,冯卫权,张涌,谢庆阁. 2003

[12]猪瘟病毒糖基化E2蛋白在重组杆状病毒中的表达与鉴定. 李文良,毛立,张纹纹,杨蕾蕾,王小敏,江杰元. 2013

[13]基于重组E2蛋白的猪瘟病毒抗体间接ELISA检测方法的建立. 孙元,夏照和,梁冰冰,彭伍平,仇华吉. 2008

[14]E2蛋白介导猪瘟病毒的细胞吸附与内化. 尹彩霞,于少雄,宋琨,李素,杨玉莹,仇华吉. 2018

[15]β-actin与猪瘟囊膜蛋白E2相互作用并参与病毒复制. 贺番,凌理军,廖亚金,李素,韩文,赵碧波,孙元,仇华吉. 2013

[16]猪瘟病毒E2蛋白A/D区单抗的制备及其抗原表位的初步研究. 张春玲,宗先伟,杨文超,张敬梅,彭明义. 2009

[17]猪瘟病毒E2基因研究进展. 唐艳强,陈彦良,刘文舒,郭小泽,肖海红,李思明. 2015

[18]CHO细胞表达牛病毒性腹泻病毒E2蛋白及免疫原性分析. 李亚军,茹毅,郝荣增,蒋成辉,王伟,张越,张贵才,刘华南,卢炳州,杨洋,陶世宇,杨锐,宋向东,陈娇,余四九,郑海学. 2022

[19]3种佐剂对猪瘟病毒E2蛋白免疫效果的影响. 陈玉梅,刘运超,祁艳华,梁超,周景明,王爱萍. 2024

[20]抗东方马脑炎病毒结构蛋白E2单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定. 赵晶,孙恩成,刘霓红,杨涛,杨银辉,耿宏伟,秦永丽,王凌凤,徐青元,吴东来. 2011

作者其他论文 更多>>

微信小程序