人FcγRⅠ受体胞外区基因的克隆、原核表达及纯化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 苗现伟

作者： 苗现伟;刘玺;张改平;席俊;张利娜;刘运超;游雷鸣;赵玉军

作者机构：

关键词： FcγRⅠ重组蛋白;原核表达;纯化

期刊名称： 细胞与分子免疫学杂志

ISSN： 1007-8738

年卷期： 2010 年 26 卷 02 期

页码： 178-180

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的:探讨人FcγRⅠ(huFcγRⅠ)胞外区蛋白的原核表达纯化及其在体外与IgG的结合活性。方法:PCR方法从人的外周血白细胞中扩增出huFcγRⅠORF区全长基因并与T载体链接,从克隆载体huFcγRⅠ-T中扩增huFcγRⅠ胞外区基因,并将其装入原核表达载体pGEX-6p-1。构建好的载体转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导重组蛋白表达,并利用SDS-PAGE和Western blot对表达的蛋白进行鉴定。结果:扩增到了huFcγRⅠ的胞外区基因,所构建的pGEXhuFcγRⅠ重组质粒经PCR和酶切鉴定与预期一致。IPTG诱导下目的蛋白的表达率约为30%。SDS-PAGE结果显示表达的目的相对分子质量(Mr)56 700与理论预期值一致。West-ern blot结果显示原核表达的huFcγRⅠ胞外区蛋白与人IgG特异亲和。结论:FcγRⅠ(huFcγRⅠ)胞外区蛋白在原核表达系统中得到有效的表达,复性蛋白在体外与人的IgG特异结合。

分类号： R392.11

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