文献类型： 中文期刊

作者： 刘春 ¹ ; 曾伟伟 ² ; 王庆 ² ; 李凯彬 ² ; 王芳 ² ; 常藕琴 ² ; 梁慧丽 ² ; 吴淑勤 ² ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院珠江水产研究所

2.中国水产科学研究院珠江水产研究所,农业部渔药创制重点实验室,广东省水产动物免疫技术重点实验室

关键词： 杂交鳢;弹状病毒;G蛋白;TaqMan real-time PCR;检测方法

期刊名称： 水产学报

ISSN： 1000-0615

年卷期： 2014 年 38 卷 01 期

页码： 136-142

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了建立一种能在临床上快速、准确检测杂交鳢弹状病毒(HSHRV)的TaqMan实时荧光定量PCR方法,利用PCR技术扩增HSHRV-C1207 G蛋白的全长序列,构建重组质粒,作为荧光定量PCR的标准品,根据HSHRV-C1207 G蛋白的保守序列,设计合成了一对能特异性扩增143 bp片段的引物和TaqMan探针,以标准品为模板建立HSHRV的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,并对该方法的灵敏度、可重复性和特异性进行评价。结果显示:建立的荧光定量PCR检测方法标准曲线有较好的线性关系,相关系数(R2)为0.999,斜率为-3.290;荧光定量PCR最低可以检测到10个病毒核酸分子拷贝,而传统PCR方法最低可检测到1×103个拷贝;38个平行样品重复性实验组内变异系数为0.84%;对其他6种水产养殖常见病毒均无扩增反应。应用该方法对采集的21份患病鳢样品进行检测,其中18份为阳性,与细胞分离和电镜观察结果相同;以传统PCR方法检测同样的样品,仅13份为阳性。本研究建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强,能较好的用于临床HSHRV的检测,对病毒病原定量检测与杂交鳢弹状病毒病的快速诊断具有重要意义。