文献类型： 中文期刊

作者： 张奇 ¹ ; 逄凤娇 ¹ ; 江艳华 ¹ ; 李风铃 ¹ ; 姚琳 ¹ ; 王联珠 ¹ ; 谭志军 ¹ ; 翟毓秀 ¹ ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部水产品质量安全检测与评价重点实验室农业部水产品质量安全风险评估实验室(青岛)

关键词： 轮状病毒;装甲RNA;Qβ噬菌体;标准参考样品;实时荧光逆转录-聚合酶链式反应

期刊名称： 中国食品卫生杂志

ISSN： 1004-8456

年卷期： 2018 年 04 期

页码： 346-352

摘要： 目的基于Qβ噬菌体装甲RNA技术构建内含A群轮状病毒(Rotavirus,RV)检测靶标的装甲RNA(Rotavirus armored RNA,AR-RV),并开展系统的初步定值、均匀性、稳定性研究。方法人工合成核酸片段QβSNRV,该片段5'端至3'端依次为Qβ噬菌体成熟酶编码基因、衣壳蛋白编码基因、包装位点序列、RV检测靶标cDNA序列、多克隆位点序列,并将其克隆到pET-28a(+)载体中构建重组质粒pET-QβSNRV。将pET-QβSNRV转化大肠埃希菌BL21(DE3)并诱导表达,利用氯化铯密度梯度超速离心、丙烯葡聚糖凝胶层析纯化AR-RV后电镜观察,并参照GB/T 15000.3—2008《标准样品工作导则(3)标准样品定值的一般原则和统计方法》规定的方法与原则对制备的AR-RV开展定值、均匀性和稳定性研究。结果十二烷基硫酸钠-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)结果证实重组质粒在大肠埃希菌中有目的条带表达,大小约为14.1 kDa;经氯化铯密度梯度超速离心、丙烯葡聚糖凝胶层析纯化的AR-RV无杂蛋白干扰;电镜下可见结构完整的病毒样颗粒,大小约为25 nm;定值结果显示,AR-RV中检测靶标RNA的含量为(1.02±0.3)×107copies/μl;均匀性分析结果为F=0.66