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稳定表达人TMPRSS2蛋白质悬浮生长MDCK细胞系的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 冯磊 1 ; 吴培培 1 ; 褚轩 1 ; 陈丽 1 ; 王伟峰 1 ; 侯继波 1 ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院/国家兽用生物制品工程技术研究中心

关键词： MDCK细胞;稳定转染;跨膜型丝氨酸蛋白酶;禽流感病毒

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2015 年 05 期

页码： 1084-1090

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了构建能稳定表达人Ⅱ型跨膜型丝氨酸蛋白酶(TMPRSS2)的重组MDCK细胞,并考察该重组细胞株对禽流感H9亚型病毒的增殖能力,采用基因工程的方法,将TMPRSS2基因克隆入真核表达载体中获得重组表达载体p IRES-TMPRSS2。采用25 000线性PEI进行悬浮生长MDCK细胞的转染操作,经两轮G418抗性筛选获得能够稳定表达该蛋白质的重组MDCK-Sus-TMPRSS2细胞。RT-PCR、Western blot以及间接免疫荧光检测(IFA)的结果显示,TMPRSS2已在该重组细胞株中正常表达。该重组细胞的悬浮比生长速率达到0.438 d-1;在3 L反应器中,最大细胞密度可达到1 ml6.83×106个。在对6株禽流感H9亚型病毒的连续盲传试验中,经MDCK-Sus-TMPRSS2细胞盲传的子代病毒可以获得较高的血凝效价和半数组织感染滴度。

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