文献类型： 中文期刊
作者： 张丽珍 1 ; 马利平 2 ; 乔雄梧 2 ; 郝变青 2 ; 王静 2 ;
作者机构： 1.山西大学生命科学与技术学院
2.山西省农业科学院省农药重点实验室
关键词： 多菌灵降解菌;16SrDNA;GFP;启动子基因文库;组成型穿梭表达载体;电转化
期刊名称： 应用与环境生物学报
ISSN： 1006-687X
年卷期： 2006 年 12 卷 04 期
页码： 555-558
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 用PCR方法扩增的多菌灵降解菌NY97-1的16SrDNA片段经TA克隆后,进行序列测定和BLAST同源序列比较分析,确定了其分类地位为短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus,B.p).经BamHⅠ酶切的启动子探针载体pUC19-gfp与NY97-1基因组DNA的Sau3AⅠ酶切片段酶连,酶连产物转化E.coliDH5a,建立B.p的启动子基因文库.挑选其中的两个强阳性克隆,亚克隆来自短小芽孢杆菌总基因组的启动子活性片段F4、F5,构建大肠杆菌-短小芽孢杆菌穿梭表达载体pNW33N-F4-gfp、pNW33N-F5-gfp.通过电转化得到gfp在B.p中的两株标记菌株.在荧光显微镜下,观察到了明亮的绿色荧光,证明活性片段F4、F5均具有组成型启动子的功能,实现了gfp基因在B.p中组成型表达,且遗传稳定,为今后研究多菌灵降解菌B.p在自然环境中的定殖、分布及动态变化打下了基础.图3表2参20
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