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巴马香猪氨基肽酶N截短基因的克隆与原核表达

文献类型： 中文期刊

作者： 王文秀 1 ; 张艳 2 ; 王宝琴 2 ; 谢金文 2 ; 刘博 2 ; 沈志强 3 ;

作者机构： 1.山东省滨州畜牧兽医研究院;海南省农业科学院畜牧兽医研究所;滨州学院生物工程学院

2.;山东省滨州畜牧兽医研究院;海南省农业科学院畜牧兽医研究所;滨州学院生物工程学院

3.;山东省滨州畜牧兽医研究院;海南省农业科学院畜牧兽医研究所;滨州学院生物工程学院;

关键词： 巴马香猪;氨基肽酶N;克隆;原核表达

期刊名称： 动物医学进展

ISSN： 1007-5038

年卷期： 2017 年 08 期

页码： 29-33

收录情况： 北大核心

摘要： 为获得猪流行性腹泻病毒(PEDV)受体猪氨基肽酶N(pAPN)抗原,提取巴马香猪小肠绒毛上皮的总RNA,PCR扩增获得pAPN基因的主要抗原区片段,并将其克隆至原核表达载体pET-32a中,将重组质粒pET-32a-pAPN转化大肠埃希菌BL21,通过不同浓度的IPTG、不同诱导时间进行诱导表达,以确定目的蛋白表达的最佳条件。经SDS-PAGE和抗组氨酸标签的单抗进行Western blot检测重组蛋白在大肠埃希菌中的表达,结果显示,原核表达产物在诱导温度37℃、IPTG浓度为0.8mmol/L,诱导4h可获得最佳表达,产物分子质量约为45ku,获得的目的蛋白大小与预期一致。

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