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转座子挽救法克隆鞘氨醇单胞菌CDS-1中呋喃丹水解酶相关基因

文献类型： 中文期刊

作者： 徐剑宏 1 ; 洪青 2 ; 武俊 3 ; 严秋香 4 ; 李顺鹏 5 ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所

2.农业部食品质量安全监控重点开放实验室

3.江苏省食品质量安全重点实验室

4.南京农业大学生命科学学院

5.农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

关键词： Sphingomonas agrestis CDS-1;呋喃丹;转座子挽救法;基因克隆

期刊名称： 应用与环境生物学报

ISSN： 1006-687X

年卷期： 2009 年 15 卷 05 期

页码： 677-681

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 用含Tn5转座子的自杀性质粒pSC123诱变呋喃丹降解菌Sphingomonas agrestis CDS-1,获得失去呋喃丹降解功能的突变株CDS-M1.以pMD18-T为载体在E. coli DH5α中构建了CDS-M1的基因组文库,采用转座子挽救法对Tn5插入位点两侧翼的序列进行克隆与测序,根据测序结果(共4551个碱基)设计引物,从CDS-1的基因组中扩增到同样大小的片段,把该片断克隆到广宿主载体pPZP201上,得到重组质粒pCDZ1,通过三亲接合的方法把pCDZ1导入CDS-M1中进行功能互补实验,结果显示CDS-M1的呋喃丹水解功能得到了恢复,表明该片断中包含呋喃丹水解酶相关基因.图7表1参14

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