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猪卵泡抑素基因成熟肽序列的克隆及其在大肠杆菌中的表达

文献类型： 中文期刊

作者： 刘玉鹏 1 ; 陈瑞爱 2 ; 李超 3 ; 施振旦 4 ;

作者机构： 1.肇庆大华农生物药品有限公司

2.广东省兽用生物制品生物技术研究与应用企业重点实验室

3.华南农业大学动物科学学院

4.江苏省农业科学院畜牧研究所

关键词： 卵泡抑素;成熟肽序列;克隆;表达

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2013 年 40 卷 11 期

页码： 12-15

收录情况： 北大核心

摘要： 根据猪卵泡抑素(follistatin,FS)基因编码区序列(GenBank登录号:M36512.1)设计并合成1对引物,经PCR扩增获得了FS基因成熟肽序列,将其克隆入pMD18-T载体并转化E.coli DH5α感受态细胞,进行PCR、双酶切及测序验证。然后将其克隆到表达载体pRSET-A的BamHⅠ和HindⅢ酶切位点之间,构建重组质粒pR-FS并转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,再经PCR、双酶切和测序验证。转化重组质粒pR-FS的重组菌经IPTG诱导后的表达产物进行SDS-PAGE分析,分子质量与预期相符,为26.1ku左右,经0.2mmol/L IPTG诱导3h之后表达量达到最高,约占总菌体蛋白的30%。表达产物可经Ni-NTA凝胶纯化。以上结果表明正确完成了猪FS基因成熟肽序列的克隆及其在大肠杆菌中的表达及纯化。

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