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猪瘟兔化弱毒疫苗株TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

文献类型： 中文期刊

作者： 刘大伟 1 ; 张小飞 2 ; 胡来根 2 ; 李郁 1 ; 尹秀凤 3 ; 毛火云 3 ;

作者机构： 1.安徽农业大学动物科技学院

2.江苏省农业科学院兽医研究所

3.南京天邦生物科技有限公司

关键词： 猪瘟兔化弱毒疫苗;荧光定量RT-PCR;检测;初步应用

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2010 年 32 卷 06 期

页码： 446-450

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立一种快速鉴定猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的方法,本研究根据GenBank中登录的HCLV株基因组序列,在Erns基因序列区内设计一对引物和一条TaqMan探针,建立了检测HCLV的荧光定量RT-PCR(FQRT-PCR)方法。该方法检测的灵敏度可达3.84拷贝/μL;而对猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、牛病毒性腹泻病毒基因组扩增结果均为阴性。实验组批内变异系数为1.05%～1.84%,批间变异系数为3.70%～5.43%。通过对32批HCLV半成品抗原和9批成品疫苗,分别用经典的兔检法测定兔体感染量(RID)和新建立的FQRT-PCR方法进行检测比较,两者有较好的相关性。结果表明,该方法具有快速、敏感、特异性强、稳定性好等优点,对HCLV生产配制及成品检验具有指导作用。

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