文献类型： 中文期刊

作者： 章丽娇 ¹ ; 赵冬敏 ¹ ; 韩凯凯 ¹ ; 黄欣梅 ¹ ; 杨婧 ¹ ; 吴凤瑶 ¹ ; 刘青涛 ¹ ; 刘宇卓 ¹ ; 张小飞 ¹ ; 李银 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所

关键词： 坦布苏病毒;复制子;RNA;转录;蛋白表达;转染

期刊名称： 江苏农业科学

ISSN： 1002-1302

年卷期： 2023 年 019 期

页码： 153-157

收录情况： 北大核心

摘要： 黄病毒RNA复制子在病毒致病机制、新型疫苗和药物研发上应用广泛，而坦布苏病毒（Tembusu virus, TMUV）是我国新发现的以引起水禽产蛋量下降为主要特征的黄病毒属成员。为构建TMUV RNA复制子，本研究以TMUV JXSP株感染性克隆为基础，利用Overlap PCR分别对病毒基因组进行CPrME、CPrM、PrME和PrM等4种方式结构蛋白基因的缺失，并在缺失部位插入绿色荧光蛋白报告基因，报告基因下游连接口蹄疫病毒2A蛋白基因序列，获得的基因组全长PCR融合产物纯化后，体外转录成mRNA,并转染至BHK-21细胞，采用荧光显微镜观察不同时间点绿色荧光蛋白的表达；利用构建的TMUV RNA复制子，将绿色荧光蛋白基因替换为H9亚型禽流感病毒HA基因，mRNA转染细胞72 h后Western blotting检测蛋白表达。结果显示，4种TMUV RNA复制子转染细胞的胞浆和胞核内均能观察到明显的绿色荧光信号；Western blotting能检测到HA蛋白的表达。结果表明，本研究成功构建了ΔCPrME、ΔCPrM、ΔPrME和ΔPrM等4种能有效表达外源基因的TMUV RNA复制子。