文献类型： 中文期刊
作者： 张雅星 1 ; 王滨 1 ; 柳学周 1 ; 徐永江 1 ; 史宝 1 ; 姜燕 1 ; 崔爱君 1 ; 张正荣 1 ; 孙冉冉 1 ;
作者机构： 1.中国水产科学研究院黄海水产研究所
关键词： 半滑舌鳎;leptin;原核表达;生物活性
期刊名称： 水产学报
ISSN： 1000-0615
年卷期： 2019 年 011 期
页码： 2279-2289
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 根据半滑舌鳎lepa和lepb编码氨基酸序列合成开放阅读框ORF肽段.利用原核表达载体pEQ30成功构建了半滑舌鳎lepa/pQE30和lepb/pQE30重组质粒,分别转化至大肠杆菌M15后,经IPTG诱导获得了N端含6个组氨酸的半滑舌鳎LepA和LepB重组蛋白.获得的重组蛋白大小均为16 ku,37°C下用0.5 mmol/L的IPTG诱导4 h后目的蛋白表达量最高,主要以包涵体形式存在.检测半滑舌鳎LepA和LepB重组蛋白浓度分别为0.3和0.25 mg/mL.Western blot免疫印迹和质谱分析表明,获得的LepA和LepB重组蛋白均具有免疫活性且序列正确.Ni2+-NTA亲和层析柱纯化可获得高纯度的半滑舌鳎LepA和LepB重组蛋白.离体孵育实验表明,获得的半滑舌鳎LepA和LepB重组蛋白能显著抑制半滑舌鳎下丘脑lepa、lepb和gnrh3 mRNA的表达水平,表明获得的重组蛋白具有明显的生物活性.研究结果可为探究leptin在半滑舌鳎生长发育中的调控机制提供重要参考.
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