文献类型： 中文期刊

作者： 张志刚 ¹ ; 张劲松 ¹ ; 邹根 ¹ ; 唐传红 ¹ ; 冯杰 ¹ ; 鲍大鹏 ¹ ; 陈建波 ¹ ; 谭贻 ¹ ;

作者机构： 1.上海师范大学生命科学学院;上海市农业科学院食用菌研究所农业农村部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点实验室

关键词： ‘沪农灵芝1号’;基因破坏;成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9(CRISPR/Cas9);曲拉通X-100

期刊名称： 食用菌学报

ISSN： 1005-9873

年卷期： 2023 年 02 期

页码： 9-18

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 构建密码子优化的cas 9表达质粒pMD-EXP-cas 9，通过聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）介导转化灵芝（Ganoderma lucidum）菌株‘沪农灵芝1号’（‘Hunong No.1’）单核菌株L1，得到含有cas9完整表达盒的菌株L1-cas9。利用T7启动子构建靶向ura3基因的表达质粒psgRNA-1和psgRNA-2，体外转录后得到sgRNA 1和sgRNA 2。通过PEG介导的转化，将sgRNA 1和sgRNA 2转化进L1-cas9的原生质体中，得到ura3基因被破坏的突变体，首次在‘沪农灵芝1号’菌株单核体中构建成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9(clustered regularly interspaced short palindromic repeat/CRISPR-associated protein 9, CRISPR/Cas9)基因编辑系统，ura3基因的编辑效率为4个突变体（107个原生质体）。利用0.006%曲拉通X-100优化PEG介导的转化系统，可使ura3基因编辑效率提高至18个以上突变体（107个原生质体），本研究的结果为灵芝基因功能的研究和分子育种提供更高效的方法。