文献类型： 中文期刊

作者： 陈佳琦 ¹ ; 吴海燕 ¹ ; 姚琳 ¹ ; 郑关超 ¹ ; 郭萌萌 ¹ ; 谭志军 ¹ ; 翟毓秀 ¹ ; 牟海津 ¹ ;

作者机构： 1.中国海洋大学食品科学与工程学院;农业部水产品质量安全检测与评价重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所

关键词： 腹泻性贝类毒素;蛋白磷酸酶抑制比色法;溶胶-凝胶;贝类;快速检测

期刊名称： 分析化学

ISSN： 0253-3820

年卷期： 2018 年 08 期

页码： 1261-1268

收录情况： EI ; 北大核心 ; CSCD

摘要： 基于腹泻性贝类毒素(Diarrhetic shellfish poisoning,DSP)的主要成分大田软海绵酸(Okadaic acid,OA)及其衍生物对蛋白磷酸酶2A(Protein phosphatase 2A,PP2A)的抑制作用,采用改进的溶胶-凝胶(Sol-gel)技术包埋PP2A,建立了快速测定贝类中DSP的新方法。以对硝基苯磷酸二钠(4-Nitrophenyl phosphate disodium,p-NPP)为底物,利用碱性条件下PP2A催化p-NPP产生的黄色水解产物对硝基苯酚(4-Nitrophenol,p-NP)在405 nm处具有强烈吸收峰,而OA及其衍生物对PP2A的抑制会减少p-NP的生成,由此建立剂量-反应关系实现对DSP定量检测。本方法基于Sol-gel技术包埋PP2A,引入D-葡萄糖增大酶凝胶微孔的孔径,添加羟乙基纤维素防止酶凝胶发生脆裂,提高和保持酶的活性及稳定性,从而改善蛋白磷酸酶抑制比色法的重现性和可靠性。本方法的检出限为50μg OA eq./kg贝组织,线性范围为50~800μg/kg;加标回收率在68.8%~119.4%之间,相对标准偏差(RSD)为5.5%~14.8%。本方法将PP2A包埋固定于微孔板底部,可在-18℃条件下保持酶活性4个月以上,使用时直接加入底物和样品溶液进行反应,省去了传统PP2A抑制比色法中每次测试需重新配制酶溶液并进行水解等预处理步骤,使DSP的检测更简便、高效。