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草鱼Mx蛋白基因的克隆与原核表达

文献类型： 中文期刊

作者： 王伟 1 ; 白俊杰 1 ; 劳海华 1 ; 叶星 1 ; 罗建仁 1 ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院珠江水产研究所中国水产科学研究院热带亚热带鱼类选育与养殖重点开放实验室

关键词： 草鱼;Mx蛋白基因;基因克隆;原核表达

期刊名称： 中国水产科学

ISSN： 1005-8737

年卷期： 2003 年 10 卷 05 期

页码： 365-369

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据已报道的Mx蛋白cDNA序列设计合成特异引物,应用逆转录 聚合酶链式反应(RT PCR)方法,从草鱼呼肠孤病毒(GCRV)诱导的草鱼(Ctenopharyngodonidellus)肝脏总RNA中扩增获得Mx蛋白cDNA,回收纯化后克隆到pGEM TEasyVector系统的T载体上。重组子的序列分析表明:所克隆的Mx蛋白cDNA长722bp,编码240个氨基酸,包括1个三联GTP结合区域和1个发动蛋白(dynamin)族特征的序列。与已知鱼类Mx蛋白基因序列比较表明,草鱼Mx蛋白基因序列与其它鱼类Mx基因相应序列具有较高的同源性,其中与斑马鱼Mx蛋白E型基因碱基序列比较同源性最高,为87.1%。将此基因改造后定向克隆至原核表达质粒pBV220,构建成重组草鱼Mx蛋白基因表达质粒pBVgcMx,并在大肠杆菌中获得高效表达,重组草鱼Mx蛋白的表达量占菌体总蛋白的26.6%。Q sephroseFF层析柱分离纯化的重组草鱼Mx蛋白纯度达95.6%。

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