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副猪嗜血杆菌ompP2基因的克隆、表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 贾爱卿 1 ; 李春玲 1 ; 王贵平 1 ; 何永龙 1 ; 袁子彦 1 ;

作者机构： 1.广东省农业科学院兽医研究所

关键词： 副猪嗜血杆菌;ompP2基因;克隆;表达;间接ELISA

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2011 年 09 期

页码： 1266-1269

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 用PCR方法扩增副猪嗜血杆菌的外膜蛋白ompP2基因,序列测定结果表明扩增片段全长1 188bp。将扩增片段插入表达载体pET-32a,转化BL21进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果证实重组融合蛋白约为60 000,West-ern-blot结果表明重组表达蛋白具有免疫反应性。以纯化的重组蛋白ompP2作为抗原,建立副猪嗜血杆菌的抗体间接ELISA检测方法。通过试验确定最佳反应条件为抗原包被质量浓度4.75mg/L,4℃包被过夜,待检血清的稀释浓度为1∶40,阳性判断标准为D630大于0.383。特异性和重复性试验表明,建立的间接ELISA方法具有良好的特异性和敏感性,可用于副猪嗜血杆菌的检测。

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