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香蕉束顶病毒cp和mp酵母双杂交诱饵质粒的构建及自激活验证

文献类型： 中文期刊

作者： 王祥 1 ; 张秀春 2 ; 余乃通 2 ; 周朋 2 ; 梁洁 2 ; 刘志昕 2 ;

作者机构： 1.海南大学农学院

2.海南大学农学院;中国热带农业科学院生物技术研究所,农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室;海南大学环境与植物保护学院

关键词： 香蕉束顶病毒;酵母双杂交;诱饵载体;构建;自激活

期刊名称： 基因组学与应用生物学

ISSN： 1674-568X

年卷期： 2014 年 33 卷 06 期

页码： 1351-1355

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 分别用两对引物PCR扩增BBTV cp、BBTV mp片段,混合各自PCR产物进行熔化退火可得到1/4两端含有Eco R玉和Bam H玉的PCR产物,分别克隆到酵母双杂交系统的p GBKT7诱饵载体中,并成功获得p GBKT7-cp和p GBKT7-mp。将重组质粒导入酵母Y2H菌株,转化成功后进行诱饵载体的自激活验证及毒性验证。结果表明,获得了正确的BBTV-cp和BBTV-mp基因片段,并成功克隆到p GBKT7诱饵载体中,同时在SD/-Trp营养缺陷平板上转化有诱饵载体的Y2H生长良好,说明诱饵载体的表达产物对酵母细胞无毒性,对报告基因也无自激活作用,最后自激活验证确定了p GBKT7-cp和p GBKT7-mp可用于该系统的互作蛋白筛选,为下一步利用酵母双杂交系统检测与CP、MP蛋白相互作用的寄主蛋白奠定基础。

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