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LAT基因簇miRNA的CRISPR/Cas9基因编辑对马立克病病毒体外复制的影响分析

文献类型: 中文期刊

作者: 楚钰淑 1 ; 滕蔓 2 ; 周子誉 2 ; 石彬 3 ; 郑鹿平 2 ; 刘金玲 2 ; 罗俊 2 ; 张改平 1 ;

作者机构: 1.河南农业大学生命科学学院

2.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室农业部动物免疫学重点实验室河南省动物免疫学重点实验室

3.扬州大学兽医学院

关键词: MDV;CRISPR/Cas9;基因编辑;miRNAs;LAT基因簇;调控功能

期刊名称: 病毒学报

ISSN: 1000-8721

年卷期: 2021 年 006 期

页码: 1428-1439

收录情况: 北大核心 ; CSCD

摘要: 病毒编码的microRNA(miRNA)在马立克病病毒(MDV)的复制、潜伏感染及诱导肿瘤发生中发挥重要的调控功能。血清1型MDV(MDV-1)编码的26个成熟体miRNA在基因组中形成3个基因簇,分别命名为Meq、Mid和LAT miRNA基因簇。本文利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,以超强毒株(vvMDV)国内代表株GX0101为研究对象,设计并合成一系列可实现LAT基因簇miRNA编辑缺失的特异性gRNA组合,成功构建了一株LAT基因簇miRNA缺失毒株GX?LAT-miRs-C21-15。经DNA测序分析、IFA鉴定及RT-qPCR分析,证实LAT基因簇miRNA被完全编辑缺失。该基因缺失毒株传代稳定性良好,miRNA的缺失不影响MDV的体外复制及相关基因表达。本研究基于CRISPR/Cas9系统,获得了稳定的LAT基因簇miRNA编辑缺失毒株,为后续相关miRNA的功能研究奠定了重要基础。

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