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转运真核表达盒的重组T7噬菌体构建

文献类型： 中文期刊

作者： 徐海 1 ; 鲍熹 1 ; 王义伟 1 ; 卢宇 1 ; 许梦薇 1 ; 侯继波 1 ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院/国家兽用生物制品工程技术研究中心

关键词： 同源重组;DNA疫苗;真核表达;T7噬菌体

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2015 年 31 卷 01 期

页码： 117-121

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了构建转运真核表达盒的重组T7噬菌体,并分别在体外、体内条件下检测其标签蛋白质EGFP的表达。以T7噬菌体基因组左侧578 bp处为插入位点,取上游400 bp和下游200 bp片段作为左右同源臂,并在其中插入表达EGFP基因的真核表达盒(EEB),构建同源重组质粒p UC-L-EEB-R。将该质粒载体转化T7噬菌体宿主细菌BL21,在噬菌体繁殖过程中完成同源重组,PCR筛选重组T7-EEB噬菌体。提取该重组噬菌体基因组转染Vero细胞后体外检测EGFP蛋白质表达,纯化的噬菌体免疫小鼠后体内检测EGFP蛋白质表达。结果显示,通过同源重组方法成功构建了携带真核表达盒的重组T7噬菌体,PCR检测和酶切鉴定均证明表达盒已正确插入。T7-EEB基因组转染真核细胞可见明显的EGFP蛋白质表达,免疫小鼠后活体荧光检测到EGFP蛋白质信号,在小鼠肝脏、脾脏组织中RT-PCR检测到EGFP基因的mRNA转录。表明同源重组方法可以用于构建重组T7噬菌体,噬菌体能够转运真核表达盒并实现蛋白质表达。

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