文献类型： 中文期刊

作者： 周卫军 ¹ ; 刘振兴 ² ; 柯浩 ² ; 马艳平 ² ; 郝乐 ² ; 徐明芳 ¹ ;

作者机构： 1.暨南大学生物工程学系实验室

2.广东省农业科学院动物卫生研究所

关键词： 鲢;Hepcidin;基因克隆;原核表达;抑菌效果

期刊名称： 南方水产科学

ISSN： 2095-0780

年卷期： 2014 年 03 期

页码： 58-64

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用同源克隆的方法从鲢(Hypophthalmichthys molitrix)的肝脏中克隆出抗菌肽Hepcidin cDNA(GenBank登入号KF312213)后,通过pET32a(+)构建含抗菌肽Hepcidin的重组质粒的pET-Hep/Rosetta菌株,在37℃、28℃和16℃下分别用0.5 mmol·L-1和1.0 mmol·L-1IPTG诱导表达,产物用Ni SepharoseTM亲和层析柱纯化并进行体外抑菌试验。鲢Hepcidin cDNA总长度755 bp,ORF为282 bp,5'UTR为108 bp,3'UTR为365 bp,编码93氨基酸,信号肽24个氨基酸,前域42个氨基酸和成熟肽27个氨基酸。pET-Hep/Rosetta在28℃和16℃主要是可溶性表达,37℃主要是包涵体表达。纯化的产物经15%SDS-PAGE电泳验证为目的产物。目的产物、pET32/Rosetta产物以及氟苯尼考的体外抑菌试验表明,目的表达产物对无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)等具有很好的抑菌效果。