文献类型： 中文期刊

作者： 贺涵 ¹ ; 阳习鹏 ¹ ; 赵婉欣 ¹ ; 邵雪花 ¹ ; 杨凤玺 ¹ ; 刘传和 ¹ ;

作者机构： 1.广东省农业科学院果树研究所

关键词： 菠萝叶基;原生质体;瞬时转化;绿色荧光蛋白

期刊名称： 西北农林科技大学学报（自然科学版）

ISSN：

年卷期： 2024 年 007 期

页码： 81-88,98

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]研究菠萝叶基原生质体的高效分离方法,并对制备的原生质体进行瞬时转化,为利用菠萝原生质体进行菠萝基因功能研究提供技术支持.[方法]以'巴厘'菠萝(Ananas comosus,'Comtede Paris')幼嫩叶片的叶基为材料,采用3因素3水平正交试验L ₉(3³)分析纤维素酶质量浓度(6,12,20 g/L)、离析酶质量浓度(3,6,9 g/L)和甘露醇浓度(0.4,0.5,0.6 mol/L)对分离原生质体产量与活力的影响;同时,利用单因素试验(设置酶解时间2,4,6 h)筛选制备原生质体的最适酶解时间,确定分离菠萝叶基原生质体的最适条件;在最适条件下制备原生质体,采用聚乙二醇(PEG)介导法转化质粒,建立菠萝原生质体瞬时转化体系.[结果]L 9(33)正交试验结果显示,不同处理分离的原生质体产量为1.01*10⁶~1.93*10⁶g^-1,纤维素酶质量浓度是决定原生质体产量的关键因素;原生质体活力为65.55%~87.00%,甘露醇浓度对原生质体活力的贡献最大.最适酶解条件为:菠萝叶基在含12 g/L纤维素酶、6 g/L离析酶、0.6 mol/L甘露醇的酶液中避光酶解4 h,产量可达1.96*10⁶g^-1,活力为85.54%.菠萝叶基原生质体通过PEG介导法转化pAN580-WRKY75质粒后,可在激光共聚焦显微镜下观察到核内的绿色荧光信号.[结论]确定了菠萝叶基原生质体的最适分离条件与瞬时转化方法,建立了适用于菠萝基因功能分析的原生质体瞬时表达体系.