文献类型： 中文期刊

作者： 滕蔓 ¹ ; 郑鹿平 ¹ ; 刘金玲 ¹ ; 柴书军 ¹ ; 张改平 ² ; 罗俊 ¹ ;

作者机构： 1.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室

2.河南农业大学牧医工程学院

关键词： 马立克病病毒(MDV);meq基因;CRISPR/Cas9;基因编辑

期刊名称： 病毒学报

ISSN： 1000-8721

年卷期： 2020 年 004 期

页码： 675-684

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 近年来,CRISPR/Cas9基因编辑技术正迅速应用于大基因组DNA病毒的编辑,尤其是一些致瘤性疱疹病毒.马立克病病毒(Marek's disease virus,MDV)属于甲亚科疱疹病毒,血清I型MDV(MDV-1)感染自然宿主可诱导快速发作的T细胞淋巴瘤.meq基因是MDV-1致瘤的主要原癌基因,在马立克病(Marek's disease,MD)肿瘤发生中具有重要作用.本文以超强毒MDV(very virulent MDV,vvMDV)国际代表株Md5和我国分离株GX0101为研究对象,设计合成了多组meq基因特异性gRNA,利用CRISPR/Cas9系统成功构建了两个meq基因缺失的毒株Md5△meq-C45和GX0101△meq-C56,并对病毒基因组相关区域进行PCR扩增和测序.结果证实,meq基因被完全编辑并敲除.间接免疫荧光实验(Indirect immunofluorescence assay,IFA)显示,MEQ蛋白在两个meq基因编辑毒株感染的CEF细胞中均无表达,并且meq基因缺失经连续15次传代仍保持稳定.通过荧光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)对病毒增殖曲线进行测定,证实meq基因编辑不影响病毒的体外复制.本研究建立了CRISPR/Cas9系统快速编辑MDV-1病毒基因的技术方法,获得了稳定的meq基因缺失毒株,为后续MDV-1的致病及致瘤机制研究、MEQ单抗筛选鉴定及诊断试剂研发等奠定了重要基础.