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罗非鱼无乳链球菌EsxA基因克隆与原核表达

文献类型： 中文期刊

作者： 马艳平 1 ; 梁志凌 1 ; 马江耀 1 ; 刘振兴 1 ; 郝乐 1 ; 柯浩 1 ;

作者机构： 1.广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省兽医公共卫生公共实验室

关键词： Ⅶ型分泌系统;无乳链球菌;EsxA基因;克隆与表达

期刊名称： 动物医学进展

ISSN： 1007-5038

年卷期： 2016 年 37 卷 04 期

页码： 35-39

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： Ⅶ型分泌系统(T7SS)是近年来发现的分泌系统,分泌两种胞外蛋白,EsxA基因编码的ESAT6蛋白和EsxB基因编码的CFP-10蛋白。分泌蛋白具有良好的免疫原性,促进细菌从巨噬细胞吞噬体逃逸、影响巨噬细胞凋亡及裂解细胞等生物学功能,与致病性密切相关。以罗非鱼源无乳链球菌为模板,克隆到294bp的EsxA基因,将目的序列克隆到pMD18-T载体,经测序,目的序列与无乳链球菌EsxA基因同源率在99%以上。EsxA基因克隆到pET32a载体中,重组载体在28℃、0.5mmol/L IPTG诱导条件下表达量最大,可溶性表达。将纯化的ESAT6蛋白免疫Balb/c鼠,成功制备ESAT6蛋白鼠多克隆抗体,经Western blot,ESAT6蛋白具有良好的反应原性。研究结果为进一步进行无乳链球菌ESAT6蛋白的免疫学功能研究奠定了基础。

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