文献类型： 中文期刊

作者： 王昆 ¹ ; 梁朋娟 ² ; 李尚勇 ² ; 王伟 ² ; 孙晶晶 ² ; 刘均忠 ² ; 孙谧 ² ; 郝建华 ³ ;

作者机构： 1.农业部极地渔业开发重点实验室海洋国家实验室海洋药物与生物制品功能实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所;上海海洋大学食品学院

2.;农业部极地渔业开发重点实验室海洋国家实验室海洋药物与生物制品功能实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所;上海海洋大学食品学院

3.;农业部极地渔业开发重点实验室海洋国家实验室海洋药物与生物制品功能实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所;上海海洋大学食品学院;

关键词： 蛋白酶抑制剂;原核表达;蛋白纯化

期刊名称： 食品与发酵工业

ISSN： 0253-990X

年卷期： 2017 年 07 期

页码： 20-26

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 低温碱性金属蛋白酶MP是从菌株YS-80-122中提取纯化的,属于沙雷氏蛋白酶家族,与该家族报道的其他酶的结构类似,在MP基因下游有一抑制剂基因lup I,该抑制剂可以完全抑制蛋白酶MP的活性。在野生型抑制剂基因的基础上,通过定点突变将Lup I的N端增加Met-Ser-Ser-Ser,命名为Lup I-MSSS,通过构建p ET28alup I-MSSS原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达,SDS-PAGE凝胶电泳结果表明该蛋白的大小约11 kDa,与预测的蛋白分子量一致。对影响蛋白诱导表达的诱导剂添加时间、诱导温度、异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度、诱导时间4个因素进行优化,并经初步优化得到了其诱导表达的条件为:接种量2%,诱导剂添加时间3 h,诱导剂IPTG终浓度0.5 mmol/L,诱导温度为37℃,诱导时间为8 h。表达的蛋白依次通过超滤,Superdex 200凝胶过滤层析,Q-Sepharose离子交换层析进行纯化,结果显示目的蛋白纯化倍数为20,比活力为15 720U/mg,活性回收率达60.7%,纯化后的lup I通过高效液相色谱法进行纯度分析,其纯度可达99%以上。