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巴西橡胶树乳管高效表达焦磷酸酶基因双元表达载体的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 于波 1 ; 吴华玲 1 ; 曾日中 1 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院橡胶研究所

关键词： 橡胶树;焦磷酸酶;REF启动子;表达载体;根癌农杆菌

期刊名称： 中国农学通报

ISSN： 1000-6850

年卷期： 2009 年 25 卷 24 期

页码： 495-500

收录情况： 北大核心

摘要： 巴西橡胶树橡胶生物合成过程中,焦磷酸酶(PPase)具有重要的调控作用。通过基因工程技术提高其在乳管中的表达,有可能促进橡胶的生物合成,从而提高橡胶树产量。笔者以巴西橡胶树叶片为材料提取DNA,用特异引物经PCR扩增获得了378bp的REF启动子片段,该片段序列与NCBI报道的REF序列间的同源性分别是98.68%和99.47%。以胶乳为材料提取总RNA,用特异引物经RT-PCR方法获得了2310bp的V-PPase基因片段,该片段序列与NCBI报道的V-PPase基因序列一致。然后通过酶切和连接,将REF启动子和V-PPase基因重组到植物表达载体pCAMBIA1301中,构建了含有潮霉素磷酸转移酶基因(hptⅡ)的乳管高效表达V-PPase基因的载体pC1301RV,然后用冻融法将其导入根癌农杆菌EHA105,为进一步通过转基因技术转化橡胶树奠定了基础。

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