文献类型： 中文期刊

作者： 李静 ¹ ; 李晓荣 ¹ ; 王冬梅 ¹ ; 郝晓燕 ¹ ; 李建平 ¹ ; 黄全生 ¹ ; 张桦 ² ;

作者机构： 1.新疆农业科学院核技术生物技术研究所/新疆农作物生物技术重点实验室

2.新疆农业大学农学院

关键词： AtCOR15a;原核表达载体;蛋白表达

期刊名称： 新疆农业科学

ISSN： 1001-4330

年卷期： 2010 年 47 卷 10 期

页码： 2031-2036

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】通过RT-PCR获得拟南芥AtCOR15a基因的ORF全长,经酶切、连接,以pET-28a(+)为原核表达载体。构建成pET28a-COR15a的重组表达载体,研究该基因在大肠杆菌中的表达情况,为进一步研究该基因的功能奠定基础。【方法】根据拟南芥AtCOR15a基因序列设计特异引物,利用RT-PCR的方法扩增目的基因,构建原核表达载体pET28a-COR15a,并将此重组质粒转化到大肠杆菌菌株BL21(DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE电泳分析,验证其蛋白表达量,并对其体系进行优化。【结果】AtCOR15a在大肠杆菌中成功表达,在37℃条件下诱导表达量最大,而30和16℃条件下蛋白表达量降低,IPTG浓度0.2~1.0 mmol/L对蛋白的表达量影响不大,并没有明显差异。但通过在不同诱导时间取样分析,结果发现加入IPTG后诱导5 h蛋白表达量最大,而8 h后逐渐降低。【结论】构建的原核表达载体在大肠杆菌中能高效表达,AtCOR15a融合蛋白分子量大约为19 kD,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。